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第一部分窒息大鼠心肺复苏模型的改良目的:改良窒息大鼠心肺复苏模型;探讨心脏停搏持续时间对自主循环恢复后6h存活率和脑含水量的影响,为后续实验确定合适的心脏停搏时间。方法:健康雄性SD大鼠36只,随机分为4组:对照组(n=6),CA1min组、CA3min组、CA5min组,后三组每组均为10只。对照组仅予气管切开插管、股动、静脉置管,手术后6h处死。其它各组予气管切开插管、股动、静脉置管,呼气末夹闭气管导管模拟窒息,心脏停搏(cardiac arrest , CA)持续1min、3min、5min后实施心肺复苏,应用心电监护仪监测三组大鼠心肺复苏期间平均动脉压(mean arterial pressure,MAP)、心率(heart rate,HR)及体温的动态变化,股动脉采血监测血气的动态变化,并观察三组大鼠自主循环恢复(restoration of spontaneous circulation,ROSC)时间、复苏成功率及ROSC后6小时的存活率及脑含水量(brain water content,BWC)。结果:CA3min组的复苏成功率、ROSC后6h存活率与CA5min组比较,有显著性差异。CA3min组BWC与CA1min比较有显著性差异(P﹤0.05)。结论:1.改进窒息大鼠心肺复苏模型,改良后的模型更加稳定,复苏成功率和ROSC后6h存活率均显著高于未改良前。2.心脏停搏3min后复苏成功率和ROSC后6h存活率均较高,ROSC后6h的BWC增加明显。利用窒息大鼠进行心肺复苏后脑水肿研究,可选择3min为实验心脏停搏时间。第二部分心肺复苏后大鼠脑组织水通道蛋白-4及其mRNA的动态变化和亚低温对其影响的研究目的:探讨复苏后早期脑水肿的变化规律,AQP4及其mRNA在脑水肿发生、发展中的作用,以及亚低温减轻心肺复苏后脑水肿的可能机制。方法:雄性SD大鼠66只,随机分为3组,分别为对照组、常温复苏组、亚低温组,后两组各自进一步分为5个亚组,即自主循环恢复后0.5、1、3、6和9小时组。建立窒息大鼠心肺复苏模型,应用干湿重法测定自主循环恢复后0.5、1、3、6和9小时脑组织含水量的变化;同时观察各时间点脑组织形态学的变化。利用免疫组织化学染色半定量分析的方法,检测相同观察时点脑组织AQP4表达水平的变化。运用RT-PCR方法检测脑组织AQP4mRNA表达的变化,分析AQP4、AQP4mRNA与BWC的相关性。结果:1.常温组大鼠,ROSC后0.5hBWC开始增加,随着时间的延长BWC明显增加,各观察时点BWC与对照组比较,均有显著性差异(P值<0.05)。脑组织形态学的变化与以上结果相符。同时,复苏后脑组织AQP4蛋白水平、AQP4mRNA的表达,也呈现出与BWC变化几乎相同的趋势。相关分析表明,BWC与脑组织AQP4、AQP4mRNA水平表达呈明显正相关,相关系数(r)分别为0.847和0.771,(P<0.01)。2. ROSC后0.5小时,亚低温组大鼠BWC和脑组织AQP4表达水平与常温组同一观察时点比较无明显变化;亚低温作用1h、3h、6h和9h时,上述指标均较相同观察时点常温复苏组明显降低(P值均<0.05)。相关分析表明,亚低温作用9h内,BWC与脑组织AQP4、AQP4mRNA表达水平呈明显正相关, r分别为0.769和0.780,( P<0.01)。结论:1.心肺复苏后0.5h已出现脑水肿,并随着ROSC时间点的延长,脑水肿逐渐加重。2.脑组织AQP4及其mRNA在ROSC后0.5h表达上调,并随着ROSC时间点的延长,逐渐增高,脑水肿严重程度和AQP4、AQP4mRNA均呈现明显正相关。提示AQP4mRNA可能通过调节AQP4表达,参与了心肺复苏后脑水肿的过程。3. ROSC后亚低温干预可减轻脑水肿,其机制可能和亚低温抑制AQP4mRNA,下调AQP4的表达有关。