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第一部分大鼠液压冲击伤神经功能评分与AQP4表达的关系目的:建立液压冲击脑损伤动物模型,观察神经功能评分和AQP4的表达规律,探讨神经功能评分与AQP4和脑水肿的关系。方法:雄性成年SD大鼠56只,体重250-350g,随机分为3组:空白对照组(NC组)4只,假手术组(SO组)4只,损伤组(TBI组)48只,再随机按伤后1h, 6h, 12h, 24h, 3d,7d六个时间点分为6组,每组8只.按文献制作液压冲击伤动物模型。SO组动物常规麻醉开颅,但不进行液压冲击,NC组不进行任何处理。NC组和SO组于术后,TBI组于术后第1h、6h、12h、24h、3d和7d各时间点先行神经功能评分,再10%水合氯醛过度麻醉,断头处死,开颅取脑,行HE染色和免疫组织化学染色方法检测AQP4。从损伤区前缘取100mg左右脑组织应用干湿重法测脑组织含水量。损伤区后缘脑组织用于免疫蛋白印迹(Western Blot)检测AQP4蛋白表达。结果:1动物一般状况:大鼠在液压冲击伤后均立即出现前肢抱握屈曲、肌张力增高、竖毛、弓背、心率增快等表现,且可出现呼吸暂停,持续时间约(15±2)s,一般可自行恢复呼吸。随后昏迷、反射减弱。清醒后精神萎靡不振,活动减少。2神经功能评分:TBI组与SO组比较,在伤后各个时间点评分降低(P<0.05);TBI组在伤后1h开始评分逐渐升高,在伤后12h出现拐点,到伤后24h时下降至最低值,于伤后3d时有所升高,但仍低于12h,随后逐渐升高。3组织学观察:损伤灶周围脑组织于伤后6h开始出现细胞水肿,伤后12h细胞水肿程度较前明显,伤后24h水肿范围进一步扩大,水肿程度达到高峰,并有胶质细胞的增生,伤后3h仍可观察到周围明显水肿,但较24h时有所减轻,胶质细胞比之前增生明显。伤后7d水肿基本减退,胶质细胞仍增生明显。4脑水含量:自伤后6h[(79.21±1.09)%]脑组织含水量开始增加, 24h[82.19±0.97)%]时达到最高,持续至3d[(81.74±1.69)%],然后开始下降,7d时[(80.45±0.7)%]基本恢复。5免疫组织化学:脑组织AQP4蛋白主要表达于星形胶质细胞和室管膜细胞内,尤其富集于与毛细血管和软脑摸直接接触的星形胶质细胞足突中。结果显示损伤组水肿脑组织AQP4于伤后6h开始增加(0.1738±0.076), 24h达最高峰(0.1912±0.085),持续至3d(0.1788±0.099)后开始下降,但7d时仍高于SO组。6 Western Blot:TBI组在水肿脑组织AQP4蛋白表达在伤后6h开始增高(0.3896±0.098),在伤后12h(0.6471±0.0469)持续增加,于24h(0.7211±0.0784)达最大值,持续到3d(0.5617±0.0726)开始下降,至7d仍高于正常脑组织。7神经功能评分与脑水肿、AQP4的相关性: TBI组在伤后12h到7d之间神经功能评分与脑含水量呈负相关(r=-0.615,P<0.001),与AQP4蛋白表达也呈负相关(r=-0.605,P<0.05)。脑含水量与AQP4蛋白表达呈相关性(r=0.84,P<0.05)。结论:液压冲击伤大鼠的神经功能障碍与继发性脑水肿密切相关,其中AQP4通过介导脑水肿加重神经功能损伤。第二部分不同剂量地塞米松对大鼠液压冲击伤脑水肿AQP4表达的影响目的:建立液压冲击脑损伤动物模型,应用不同剂量地塞米松干预,采用免疫组织化学、Western Blot、RT-PCR技术,从蛋白子和基因不同水平动态观察AQP4及其mRNA的表达变化,探讨不同剂量地塞米松对液压冲击性脑水肿AQP4表达的影响,并寻找临床应用的最佳剂量。方法:健康成年雄性SD大鼠200只,体重250-350g,随机分为4组:单纯损伤组(D0组)、地塞米松1组(D1)、地塞米松2组(D2)和地塞米松4组(D4)。每组再按伤后1h、6h、12h、24h、3d、7d六个时间段分为6个亚组,每亚组8只。假手术组(SO组)和空白对照组(NC组)各4只。D1组、D2组、D4组动物分别术后腹腔注射地塞米松1mg/kg, 2mg/kg,4mg/kg,每天2次,共7天。D0组动物腹腔注射等量生理盐水,每天2次,共7天。SO组只常规麻醉开颅但不液压冲击。NC组腹腔注射等量生理盐水。SO组和NC组于术后,D1组、D2组、D4组分别于相应时间点行神经功能评分,并过度麻醉、断头处死,取材,分别测定脑含水量、组织学观察,应用免疫组化、Western Blot、PT-PCR动态观察AQP4及其mRNA表达变化,同第一部分。结果:1神经功能评分:D0组与SO组比较,在伤后各个时间点评分降低(P<0.05); D1组、D2组、D4组的神经功能评分与D0组比较升高,差异有统计学意义(P<0.05)。2组织学:D1、D2、D4组各个时间点与D0组比较,脑水肿程度和范围有所减轻,细胞肿胀减弱,胶质细胞肿胀轻微,神经元较前改善,周围间隙缩小。3脑水含量:伤后1h[(78.49±1.09)%]与SO组[(77.16±0.94)%]比较,差别无统计学意义(P>0.05)。自伤后6h脑组织含水量开始增加[(79.36±1.09)%],在伤后24h时达到最高[(82.19±0.97)%],持续至3d[(81.74±1.690%],然后开始下降,7d时[(80.45±0.7)%]基本恢复。D1组、D2组、D4组与D0组趋势一致。D1组、D2组和D4组在1h时分别与损伤组比较,差别无统计学意义(P>0.05)。D1组、D2组、D4组在伤后6h、12h、24h、3d和7d与损伤组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。D1组、D2组、D4间比较差异无统计学意义(P>0.05)。4 AQP4蛋白及其mRNA表达:D0组和干预组AQP4蛋白及其AQP4mRNA均是在伤后24h时达到高峰值,并持续到3d。干预组在6h,12h,24h,3d和7d与损伤组比较差异有统计学意义(P<0.05),但D1组、D2组、D4组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1地塞米松能够通过下调AQP4及其mRNA的表达来发挥减轻脑水肿的作用。2不同剂量地塞米松对AQP4和脑水肿的影响无统计学意义,提示临床应用地塞米松应早期、小剂量、短期为佳。