树突状细胞(dendritic cells，DCs)是一种最具潜能的抗原提呈细胞，其对抗原进行捕获、加工，处理后提呈给MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子，诱导T淋巴细胞的增殖，在增强或调节细胞介导的免疫反应中起着决定性作用。慢性乙型肝炎患者免疫功能低下是否与DCs的功能有关，目前未见有报道，为此，我们探讨了慢性乙型肝炎患者不同类型DCs的功能特点和其在机体免疫反应中的作用机理。 本研究对45例慢性乙型肝炎患者和15例正常人进行了DCs的分离培养和相关的功能检测，同时对68例患者及16例正常人进行了DCs亚群的检测，探讨了一种与DCs有关的在体内专职产生干扰素(IFN-α／β)的特异性细胞，简称IPCs (Interferon producing cells)细胞及其与慢性肝炎发病的关系。同时在体外用纯的抗原(HBsAg)刺激DCs，观察其对T细胞增殖能力的作用及对2．2．15细胞培养上清中病毒标志物的抑制作用，以期通过进一步明确慢性乙型肝炎患者体内DCs的功能特点和相关的抗病毒机制，为慢性乙型肝炎的治疗探索一条新的途径。 实验结果显示，体外用含10％胎牛血清(FBS)的RPMI-1640完全培养基(加GM-CSF和IL-4)诱导人的外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)来培养DCs，在第3d起，细胞出现增殖，随后细胞增殖速度加快，到12d时， 军医进修学院博士论文 摘 要 细胞增殖数量达到最大值，可以扩增出大量的DCS。进一步加入 Fit3儿可以在早期促进细胞增殖，井增加细胞的终产量。这可 能与外周血来源的CD 14‘细胞表达高水平的Fit3有关。同时发现 相同培养条件下，CHB患者的DCS增殖数量较正常人明显降低， 似乎在CHB病人中存在着DCS的功能缺失。 通过流式细胞仪对正常人和慢性乙肝患者DCS表面分子的表 达进行分析发现表达于CHB患者DCS表面的共刺激分于CD80 （B7－1）、CD86（B7－2）、CDla及 MHC－11 类分于（HLA－DR）的水 平明显降低（患者为 44．27士7．760、44．12土8．16O、25．32f7．46O 及46．二5士8．96％；正常人分别为87．62土9．67、8一．3吕士9．72、吕9．56 土吕．96和92．47土9，34），特别是CHB个C表面的CDla分子的表达 显著低于正常人。并且本实验还对DCs进行了其它表面分子的 检测，如：CD40、CDll巳 CD83和 CD123等，结果与前面的实 验结果相同：患者的 DCS表面的 CD40、CDll。、CD83和 CD123 分子的表达率均明显低于正常人的DCS。进一步对患者的DCS进 行混合淋巴细胞反应（MLR）检测发现，CHB－DC刺激T淋巴细胞 增殖的能力亦低于正常人，并且在MLR反应上清及纯的DCS培养 上清中其产生几－12水平下降而一氧化氮（NO）水平却升高，NO 被认为可通过抑制多种酶的作用而损伤健康组织。由此可见在CHB 患者中不仅 DC S的表型不成熟并且存在着功能的缺失。其原因可 能是由于其共刺激分子表达的降低和／或细胞因子产生的减少所 致。本研究检测的45例CHB 患者中大部分患者HBeAg 阳性 （3／45），也有可能说明 DCS功能的降低与乙肝病毒复制的活跃 程度相关。 在慢性肝炎患者外周血中存在着明显的IPCS数量的降低， 平均只占其外周血PBMC的0．097儿 而明显低于正常人的0．31％ （WO．001）。因IPCs是一种11型DCs的前体细胞（pDCZs），我 们在检测患者和正常人外周血中的 CD 23“DCS 的百分数发现， CD 23”DCs的百分数与IPCs细胞所占外周血PBMC的百分数值 明显近似（分别为 0．22士0．193和 0．218土0．195；0．302土0．126 4 牟医进修学院博士论文 摘 要】和 0．304土0·110）。七乎说明 CD123“DCS细胞也就是 11 型DCS；的前体细胞… J，与 IpCs属于同一类细胞。IpCs的缺乏， 也是导致慢性乙型肝炎患者体内抗原提呈细胞的下降，不能将病 毒抗原特异性地提呈给体内的细胞毒性 T淋巴细胞uTLS人 发 挥杀病毒作用，这可能也是导致慢性肝炎病程慢性化及免疫耐受 的另一个原因。同时检测了正常人与CHB患者T淋巴细胞亚群的 变化，发现思者外周血中 CD4’／CDS”比值明显高于正常人（患者 与正常人的比值分别为：1＊3土0．582和1．41土0．436，t－2．78， P＜0刀1）。可能是由于机体产生免疫耐受而导致C08”的数量下降， 使机体清除病毒能力降低。 本研究用