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Interlukin22(IL-22)属于IL-10细胞因子家族,由活性T细胞产生,参与特定组织的细胞应答。IL-22通过IL-22受体蛋白(IL-22 receptor, IL-22R)介导信号传递,发挥其生物学功能。IL-22R是一个由IL-22R1和IL-10R2共同组成的异二聚体受体复合物。目前,已有多项研究证实IL-22能够活化肿瘤细胞MAPK信号通路,但其机制尚未明确。我们以人结肠癌细胞SW480为模型,发现IL-22刺激能够活化IL-22R1,酪氨酸磷酸化的IL-22R1可招募蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2。此外,IL-22R1的Tyr-251和Tyr-301位点对于Shp2与IL-22R1的结合是必需的,只有具有酪氨酸磷酸酶活性的Shp2与IL-22R1结合后,IL-22才能活化胞内的MAPK激酶及Stat3。本研究结果表明Shp2在IL-22介导的MAPK信号转导通路中具有至关重要的作用。方法1.分子亚克隆技术,及PCR法定点诱变2.细胞培养,脂质体转染细胞,瞬时表达目的基因3.利用FLP-In-293系统,构建稳定表达细胞系4. Facs检测细胞表面特定蛋白的表达5.免疫沉淀技术检测特定蛋白间的相互作用6. Western法检测细胞内蛋白表达7. WST-1法检测细胞增殖情况结果1.构建质粒pcDNA3.1-IL22R1-flag、pcDNA3.1-IL-22R1-Y251F-flag、pcDNA3.1-IL-22R1-Y301F-flag、pcDNA3.1-IL-22R1-FF-flag、pcDNA5/FRT-IL22R1-Flag、pcDNA5/FRT-IL22R1-FF-Flag,用于瞬时表达。2.构建稳定表达细胞系Flp-In-293/IL-22R1、Flp-In-293/IL-22R1-FF。3. IL-22可诱导Shp2与IL-22R1的结合,以及Src, Erk1/2和STAT3的活化。4.在HEK293中,内外源Shp2都可与瞬时表达的IL-22R1结合。5. IL-22R1的Tyr-251和Tyr-301位点对其与Shp2结合及IL-22刺激引起Erk2、Stat3活化是必需的。6. Shp2的酪氨酸磷酸酶活性对于IL-22诱导的Erk2活化及细胞增殖是必需的。7. Shp2与IL-22R1的结合对IL-22诱导的细胞增殖具有显著影响。综上所述,本研究发现经IL-22刺激后,Shp2被招募至IL-22R1,且IL-22R1的Tyr 251及Tyr301位点对于IL-22诱导的Shp2与IL-22R1的结合,及Erk2的活化均是必需的。此外,Shp2与IL-22R1的相互作用与IL-22诱导的STAT3的活化相关,这是有关Shp2参与调节IL-22介导的MAPK通路的首次报道。