【摘 要】
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宽叶腹水草(Veronicastrum latifolium(Hemsl.)Yamazaki)是分布在江苏省、安徽省和浙江省等地的一种玄参科腹水草属植物。全草均可入药,医学临床可用于治疗或缓解肝腹水,肝硬化;胃溃疡;肾炎引起的水肿;民间常用于跌打损伤引起的软组织损伤,肿胀疼痛等症状;疮痈肿毒引起的皮肤剧痛、红肿、化脓;寻常烫伤;毒蛇咬伤血液中毒导致的水疱、皮肤组织损伤等症状。宽叶腹水草富含黄酮、甾
【基金项目】
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国家重点研发计划项目(2016YD0600805); 高等学校学科创新引智计划(111计划)B20088项目;
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宽叶腹水草(Veronicastrum latifolium(Hemsl.)Yamazaki)是分布在江苏省、安徽省和浙江省等地的一种玄参科腹水草属植物。全草均可入药,医学临床可用于治疗或缓解肝腹水,肝硬化;胃溃疡;肾炎引起的水肿;民间常用于跌打损伤引起的软组织损伤,肿胀疼痛等症状;疮痈肿毒引起的皮肤剧痛、红肿、化脓;寻常烫伤;毒蛇咬伤血液中毒导致的水疱、皮肤组织损伤等症状。宽叶腹水草富含黄酮、甾醇、鞣质等化合物使其拥有丰富的临床应用。目前,宽叶腹水草主要在民间应用,在现有的报道中发现,很多研究对于宽叶腹水草所含成分的阐述相对少见,且主要集中于水提物或醇提物的研究,没有相关研究使用更高效的提取方式对其含有的黄酮类化合物进行有效的提取分离。所以,本研究对其所含的八种黄酮类成分进行了提取、定量分析与抗菌生物活性的研究。以黄酮类化合物含量为指标,通过单因素实验及后期的响应面法优化了微波辅助低共熔溶剂提取法并且对比了此方法其他不同提取方法对各成分含量的影响,接下来选取大孔吸附树脂作为富集纯化材料展开对所得提取液中八种目标化合物的富集工作。将经过富集后的产物用于宽叶腹水草的黄酮类化合物的体外抗菌活性初步评价。本研究主要成果如下:1.建立了高效液相色谱法(HPLC)检测分析宽叶腹水草中的牡荆素(Vitexin,VIT)、木犀草素(Luteolin,LUT)、汉黄芩苷(Wogonoside,WOG)、芹菜素(Apigenin,API)、高车前素(Hispidulin,HIS)、金圣草黄素(Chrysoeriol,CHR)、金合欢素(Acacetin,ACE)、柳穿鱼黄素(Pectolinarigenin,PEC)方法。2.结合单因素实验结果,运用BBD实验和RSD法探究微波辅助低共熔溶剂提取宽叶腹水草中八种黄酮类成分的工艺条件,当提取工艺条件设定为:低共熔溶剂(氯化胆碱/三乙二醇=1/4,含水率为40%),微波温度为62℃,微波时间为15 min,固液比为1:20(g/m L)时,得到的宽叶腹水草中的八个黄酮成分的提取率可达到1.542 mg/g、1.503 mg/g、0.558 mg/g、1.297 mg/g、1.805 mg/g、1.204 mg/g、3.747 mg/g、5.391 mg/g,体现最优提取效果,并且提取结果高于超声辅助低共熔溶剂、热回流辅助低共熔溶剂及乙醇辅助微波提取方法。3.选择大孔吸附树脂作为富集分离材料用于宽叶腹水草提取液的分离富集研究,探究了D-101、AB-8、HPD-100、HPD-400、HPD-826和NKA-9这六种型号的大孔吸附树脂对宽叶腹水草中黄酮类成分的分离富集能力,综合考察这6中树脂材料的吸附能力和解析能力后发现AB-8型树脂对八种成分的回收率最高。进一步考察了腹水草富集物的抗菌活性,发现宽叶腹水草富集物对实验选取的6种供试菌株表现出不同程度的抑菌效果,在一定浓度范围内呈现剂量依赖。但是金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC)值说明,它们对宽叶腹水草富集物的的敏感程度更高;于是进一步通过时间-杀菌曲线考察富集物对三种菌株的动态杀菌效果,得出富集物对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最强,通过细菌染色发现宽叶腹水草富集物可通过破坏细菌细胞膜从而发挥其抑菌作用。综上,本研究开发的微波辅助低共熔溶剂法,可以更加高效地提取宽叶腹水草黄酮类化合物,与传统的几种提取方法对比可知本方法绿色高效,纯度高,彰显了“绿色化学”的优势,并且研究表明宽叶腹水草黄酮类化合物具有较好的抗菌活性。本研究为宽叶腹水草资源的高效利用奠定了基础,宽叶腹水草中得到的黄酮类化合物,具有更广阔的研发与应用潜力,丰富了我国中草药资源的开发利用。
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