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目的:通过RNA干扰技术，靶向沉默人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞Notch1基因，评估Notch1表达下调后对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡，相关蛋白Hes-1、Jagged-1、Jagged-2及Bcl-2、PTEN/PI3K/AKT信号通路的影响，进一步探讨Notch1在多发性骨髓瘤发生发展中的作用及分子机制，为寻找新的骨髓瘤治疗靶点提供实验依据。
方法:构建靶向沉默Notch1基因的shRNA表达载体pGshRNA-Notch1，转染入人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞，G418筛选稳定转染细胞。实时荧光定量PCR及Western blot法检测转染后Notch1 mRNA和蛋白表达的变化。CCK-8法、流式细胞仪检测瘤细胞体外增殖、凋亡的变化。建立NOD/SCID小鼠多发性骨髓瘤模型，通过观察成瘤时间、大小以及ELISA法检测血清中分泌IL-6、VEGF水平以研究Notch1基因沉默对致瘤性的影响。运用Western blot法检测Notch1信号通路相关蛋白Hes-1、Jegged-1、Jegged-2、Bcl-2、PTEN、AKT、p-AKT的表达情况。
结果:筛选出稳定转染细胞，实时荧光定量PCR及Western blot法检测Notch1 mRNA和蛋白表达的变化，实验组相对于阴性对照组表达量明显下调(P＜0.05)。CCK-8法及流式细胞术检测结果显示，实验组细胞的增殖活力明显低于阴性对照组(P＜0.05)，且对细胞凋亡有明显促进作用(P＜0.05)。动物实验结果显示Notch1沉默细胞皮下成瘤体积小，血清中分泌IL-6和VEGF较阴性对照组减少(P＜0.05)。实验组Jegged-1、Jegged-2和AKT蛋白表达水平与对照组相比无明显变化，而下游蛋白Hes-1、Bcl-2、p-AKT明显下调，PTEN明显上调。
结论:1.沉默Notch1基因可抑制骨髓瘤RPMI8226细胞体内外增殖，促进细胞凋亡，明显减低骨髓瘤细胞的致瘤性;2.作用机制可能与下调下游蛋白Hes-1表达以调节PI3K/AKT信号通路以及瘤细胞分泌IL-6和VEGF的能力减低有关;3.Notch信号通路可能作为新的治疗骨髓瘤的靶点。