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目的:探讨虫草素(Cordycepin)对胆管癌细胞增殖和迁移的抑制作用及其分子机制。材料和方法:MTT法检测不同浓度虫草素对胆管癌细胞活力的抑制作用;平板克隆形成实验检测虫草素对胆管癌细胞集落形成能力的影响;Hoechst33342染色观察虫草素处理后的细胞内凋亡小体的形成情况;AnnexinV/PI双染流式细胞术检测虫草素用药后的细胞凋亡率;划痕愈合实验和Transwell小室迁移实验检测虫草素对胆管癌细胞迁移能力的影响;免疫荧光染色法检测虫草素处理后胆管癌细胞E-Cadherin和Vimentin的表达情况;蛋白印迹实验检测凋亡相关蛋白、EMT标志物蛋白、Akt信号通路和Erk1/2信号通路相关蛋白及DEK蛋白的表达水平;DEK基因沉默后检测胆管癌细胞增殖活力、克隆形成能力和迁移能力;RT-PCR实验检测正常胆管及多种胆管癌细胞系中DEK的mRNA表达水平;免疫组织化学染色法检测人胆管癌组织中DEK和裸鼠荷瘤中E-Cadherin、Vimentin、p-Akt、p-Erk1/2及DEK的表达水平;裸鼠荷瘤实验检测虫草素在体内对胆管癌的抑制作用。结果:1.MTT实验结果显示:用0μM、25μM、50μM、100μM、200μM的虫草素处理胆管癌HuCCT1细胞,用0μM、37.5μM、75μM、150μM、300μM的虫草素处理胆管癌CCKS1细胞分别作用24 h、48 h、72 h后,与对照组相比,虫草素处理组的细胞活力明显被抑制,并且呈时间-剂量依赖性(P<0.05);2.平板克隆形成实验结果显示:分别用不同浓度虫草素处理胆管癌细胞14d后,与对照组相比,虫草素处理组的细胞集落形成能力显著受到抑制,且呈剂量依赖性(P<0.05);3.Hoechst33342染色结果显示:经100μM虫草素处理HuCCT1和150 μ虫草素处理CCKS1 48 h后与对照组相比,呈亮蓝色的细胞核明显增多;4.AnnexinV/PI双染流式细胞仪检测结果显示:经虫草素处理后的胆管癌细胞中,与对照组相比,其细胞凋亡率显著升高(P<0.05);5.划痕愈合实验结果显示:用不同浓度虫草素处理胆管癌细胞12h后,与对照组相比,虫草素处理组的细胞横向迁移距离明显缩短,且呈剂量依赖性(P<0.05);6.Transwell小室迁移实验结果显示:经虫草素处理12 h后,与对照组相比,其纵向迁移能力受到显著抑制(P<0.05);7.免疫荧光染色实验结果显示:经虫草素处理24h后,与对照组相比,E-Cadherin的表达水平升高,Vimentin的表达水平降低;8.蛋白印迹实验结果显示:与对照组相比,虫草素处理组的凋亡相关蛋白 Cleaved caspase 9、Cleaved caspase 3 和 Cleaved PARP 的表达上调;EMT 标志物蛋白E-Cadherin的表达上调,Vimentin、Snail、Slug、MMP9的表达下调;Akt信号通路相关蛋白Akt和4EBP1以及Erk1/2信号通路相关蛋白Erk1/2的磷酸化水平下降,其相关总蛋白的表达量并无明显变化;DEK的表达量显著下降;9.免疫组织化学染色结果显示,与癌旁组织相比,DEK在人胆管癌组织中的表达水平显著升高;10.RT-PCR实验结果显示,胆管癌细胞中的DEK表达水平显著高于正常胆管上皮细胞;11.DEK基因沉默明显抑制胆管癌细胞活力、克隆形成能力及迁移能力(P<0.05);12.DEK基因沉默显著抑制Akt和Erk1/2蛋白的磷酸化水平,应用了 Akt抑制剂Akti-1/2和Erk1/2抑制剂GDC-0994后,DEK蛋白表达无明显差异。13.裸鼠荷瘤实验结果显示:与对照组相比,虫草素用药组的裸鼠体重无明显差异,而其相对肿瘤大小在给药第9天开始具有显著差异(P<0.05);14.免疫组织化学染色结果显示,与对照组相比,虫草素用药组中E-Cadherin、Vimentin、p-Akt、p-Erk1/2及DEK的表达量减少。结论:1.虫草素抑制胆管癌细胞增殖和迁移与诱导细胞凋亡及抑制EMT的发生相关;2.虫草素抑制胆管癌细胞增殖和迁移与抑制Akt和Erk1/2信号通路相关;3.虫草素靶向DEK调控Akt和Erk1/2信号通路抑制胆管癌的增殖和迁移。