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【目的】肾脏移植是终末期肾病的最佳替代治疗手段,受者接受肾移植后需长期服用免疫抑制剂。移植入无排异反应的人工合成组织工程肾脏可解除长期服药痛苦。猪肾因与人肾生理性能相似而倍受期待,但异种细胞共培养的物种差异还尚未见报道。本研究主要目的是灌注制备家猪、新西兰兔、SD大鼠肾脏去细胞生物支架,并探究三者肾支架对异种共培养种子细胞人胚肾上皮细胞(HEK)的影响。【方法】健康成年家猪10头、新西兰白兔28只、SD大鼠28只,分别将获取的肾脏随机均等分为正常组和支架组,支架组由肾动脉依次灌入肝素、1%Triton X-100和1%SDS溶液完成去细胞化。两组肾脏分别作组织形态学鉴定并检测机械力学性质。去细胞支架作组织爬片与人胚肾上皮细胞共培养,观察细胞在支架爬片上的生长状况,免疫荧光检测人胚肾上皮细胞PCNA及DAPI表达量,并收集荧光图片作灰度分析。【结果】家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾脏经灌注去细胞后HE核染色阴性,Masson染色显示胶原蛋白阳性,Collagen I和Collagen IV荧光染色阳性,三种物种肾正常组DNA含量远高于支架组DNA含量,差异有统计学意义(P<0.05);电镜扫描可见去细胞支架内蜂窝状孔洞结构,并可见典型的肾小球龛样结构;支架组肾杨氏模量与正常组相比差异无统计学意义;HEK细胞荧光染色图像灰度分析显示家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾支架组PCNA/DAPI值高于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05),而三组支架组之间PCNA/DAPI值对比差异无统计学意义。【结论】本研究灌注去细胞方法可去除家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾脏内的细胞及细胞核,保留细胞外基质,维持细胞外基质的三维空间结构和机械力学强度,是一种可靠有效的制备家猪、新西兰白兔、SD大鼠肾脏去细胞生物支架方法,灌注制备的去细胞支架均可提高异种共培养人胚肾上皮细胞HEK的增殖活性,且这种提高作用在家猪、新西兰白兔和SD大鼠之间并无物种差异性。