论文部分内容阅读
目的:在成功构建肥胖大鼠模型的基础上,探讨GIRK4基因在正常与肥胖大鼠肾脏组织表达水平的差异,进而为研究GIRK4与肾脏内分泌及代谢功能的关系奠定基础。 方法:1)选取同种系体形相近健康SD大鼠30只,先按雌雄把实验大鼠分为2组,然后采用随机编号分组的方法对实验大鼠进一步分组,并确保实验组20只,雌雄各半;对照组10只,雌雄各半。2)在造模过程中,由固定培训合格人员进行饲养及管理,实验组大鼠给予高脂高糖饮食,对照组大鼠给予普通基础饲料正常喂养;饲养期间每周测量实验组及对照组SD大鼠体长及体重。3)喂养至第9周(共8周+2天)完成造模实验,实验组大鼠体重超过对照组体重均数的25%入选为肥胖组;对照组健存大鼠视为正常组进行后续试验。禁食12小时后,处死肥胖组和正常组入选大鼠,留取血样行生化指标检测血清总胆固醇、甘油三酯、葡萄糖,并留取肾脏等组织器官液氮罐保存备用。4)使用胞浆总蛋白提取RIPA试剂盒,对肥胖组及正常组SD大鼠肾脏组织胞浆总蛋白进行提取。5)采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)对肥胖组及正常组SD大鼠肾脏组织胞浆总蛋白进行垂直电泳。6)电泳结束后,通过半干式转移电泳仪把蛋白转移到PVDF膜上。7)成功转膜后,把PVDF膜浸在含5%脱脂奶粉的封闭液中4°C过夜封闭。然后把目的蛋白膜及内参蛋白膜分别用GIRK4一抗溶液和内参溶液孵育。然后把目的蛋白膜、内参蛋白膜分别用GIRK4二抗溶液、GADPH抗体溶液孵育。8)用ECL试剂盒暗室显影,X光胶片曝光、洗片可显示GIRK4及GADPH蛋白质条带。置于凝胶成像仪中照相并应用QuantityOne软件对GIRK4及GADPH蛋白质条带灰度进行定量分析处理,用GIRK4蛋白目的条带与GADPH条带的灰度值比值表示GIRK4蛋白相对表达强度(GIRK4/GADPH);采用SPSS17.0软件包对数据进行分析处理。 结果:1)本实验通过饮食诱导的方式构建肥胖SD大鼠模型的致肥率为66.67%,肥胖组大鼠体长及体重、脂肪垫湿重、脂肪系数均大于正常组(P<0.001),血糖、总胆固醇、甘油三酯水平均高于正常组(P<0.05)。2)正常组与肥胖组SD大鼠肾脏组织GIRK4蛋白相对表达量分别为:3.37±0.68、1.75±0.42,两组大鼠肾脏组织GIRK4/GADPH相对表达量差异具有统计学意义(P﹤0.05)。 结论:1)本实验通过调整高糖高脂饲料配比方案,成功构建了高质量的SD大鼠肥胖模型;这将为今后探索肥胖致病的相关机制及肥胖的治疗方案探索,提供高效率的造模方案。2)肥胖大鼠肾脏组织GIRK4蛋白低表达,将为探索肥胖机体内GIRK4与肾素分泌、胰岛素及水盐代谢等与肾脏相关临床疾病的关系奠定基础。