论文部分内容阅读
目的： 观察H9C2心肌细胞在乙醇所致的氧化应激损伤以及阿托伐他汀钙对乙醇所致的H9C2心肌细胞氧化应激损伤的保护作用。 方法： 常规方法培养H9C2心肌细胞，在培养24h后随机分组:正常对照组（Control组）、200mmol/L乙醇组（alcohol组）、10-7mol/L阿托伐他汀钙预处理组，10-6mol/L阿托伐他汀钙预处理组，10-5mol/L阿托伐他汀钙预处理组，用MTT法检测乙醇所致的氧化应激损伤心肌细胞存活率的影响以及经阿托伐他汀钙干预对心肌细胞存活率的影响;LDH、MDA、SOD试剂盒检测乙醇所致的H9C2心肌细胞氧化应激损伤细胞及阿托伐他汀钙对心肌细胞的保护作用。ROS检测阿托伐他汀钙的保护作用。 结果： 1、细胞存活率:不同浓度的乙醇对H9c2细胞存活率的影响与乙醇浓度有直接相关性，随着乙醇浓度的升高H9c2细胞存活率呈逐渐下降趋势。高浓度的阿托伐他汀钙(10-4 mol/L)处理H9c2细胞48小时的存活率为88.59％较对照组细胞存活率明显降低(P＜0.01)，出现增殖抑制效应，阿托伐他汀钙终浓度为10-7mol/L～10-5mol/L时存活率为100.87±4.30％、95.03±10.23％、101.60±8.94％，与对照组相比对细胞存活率无影响。10-8mol/L～10-5mol/L阿托伐他汀钙预处理24小时之后再加入乙醇处理24小时的H9c2细胞的存活率分别为56.38±5.63％，64.91±6.64％，73.77±7.34％和90.69±8.66％，随着阿托伐他汀钙浓度的增加细胞存活率明显升高。 2、乙醇组在乙醇作用后H9c2细胞受到损伤，LDH较对照组明显增高，损伤后MDA亦较对照组明显增高，SOD较对照组明显降低。不同浓度阿托伐他汀钙(10-7～10-5 mol/L)预处理24h后培养细胞，在乙醇损伤过程中，均较乙醇组细胞损伤小，表现为反映细胞损伤的指标LDH分别为198.25±15.02U/L，166.06±17.32U/L，112.67±16.88U/L;脂质过氧化产物MDA含量分别为1.88.±0.09nmol/mg protein,1.67±0.13nmol/mg protein,1.19nmol/mgprotein;而起保护作用的SOD则较乙醇组明显增加，分别为35.43.±3.04/mgprotein,42.67±4.22U/mg protein,51.42±4.93U/mg protein。 3、ROS活性:正常细胞负载DCF后在细胞内呈明亮的绿色荧光，其荧光强弱可反映ROS的变化。观察发现经乙醇处理24h后，细胞内荧光强度最强，用不同浓度阿托伐他汀钙(10-7～10-5mol/L)预处理24h后，与乙醇组相比细胞内荧光强度分别下降。 结论： 本研究通过检测LDH、MDA、SOD和ROS水平的变化可以验证乙醇可对心肌细胞造成氧化应激损伤，而阿托伐他汀钙对乙醇所致H9c2细胞的氧化应激损伤具有剂量依赖性保护作用。表明阿托伐他汀钙具有抗氧化作用，减少细胞的氧化应激损伤。