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第一部分葡萄籽提取物原花青素对人膀胱癌BIU87细胞的生长抑制作用目的探讨葡萄籽提取物原花青素（grape seed procyanidin extract，GSPE）对人膀胱癌BIU87细胞及人原代皮肤成纤维细胞生长的影响。方法体外培养的人膀胱癌BIU87细胞及人原代皮肤成纤维细胞与12．5、25、50、100、200μg／ml GSPE共同孵育24 h后，观察细胞形态学改变；并采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定其对人膀胱癌BIU87细胞及人原代皮肤成纤维细胞存活的影响。结果与对照组相比，50、100、200μg／ml GSPE可引起BIU87细胞形态的明显改变，各浓度GSPE对人原代皮肤成纤维细胞形态无明显影响。12．5、25、50、100、200μg／mlGSPE作用细胞24 h后，人膀胱癌BIU87细胞存活率分别为对照组的99．55±0．50％（n=18，P＞0．05），99．16±0．63％（n=18，P＞0．05），86．98±1．48％（n=18，P＜0．01），68．18±2．06％（n=18，P＜0．01）和51．42±1．78％（n=18，P＜0．01）；与对照组相比，50、100、200μg／ml GSPE可明显抑制BIU87细胞生长，但对人原代皮肤成纤维细胞生长无明显抑制作用。结论在一定浓度范围内，GSPE可呈剂量依赖性抑制人膀胱癌BIU87细胞生长，但对人原代皮肤成纤维细胞的生长无明显影响。第二部分葡萄籽提取物原花青素对人膀胱癌BIU87细胞周期的影响及其机制探讨目的探讨GSPE对人膀胱癌BIU87细胞周期的影响及其可能机制。方法将50、100、200μg／ml的GSPE作用于人膀胱癌BIU87细胞24 h后，采用流式细胞术检测细胞周期改变，采用RT-PCR及Western blot方法检测cyclin D1和CDK4mRNA及蛋白水平的表达变化。结果流式细胞分析表明，GSPE可使人膀胱癌BIU87细胞阻滞于G1期，0、50、100、200μg／ml GSPE对应的阻滞于G1期的肿瘤细胞平均比例分别为48．46、55．73、69．81和79．18％。RT-PCR及Western blot分析表明，随着GSPE浓度的增高，BIU87细胞cyclinD1和CDK4 mRNA及蛋白表达减少，半定量分析显示，各浓度组间差别有明显的统计学意义（P＜0．01）。结论GSPE可呈浓度依赖性阻滞BIU87细胞于G1期。其机制可能与下调细胞周期相关因子cyclin D1和CDK4的表达有关。第三部分葡萄籽提取物原花青素对人膀胱癌BIU87细胞凋亡的影响及其机制探讨目的探讨GSPE对人膀胱癌BIU87细胞凋亡的影响及其可能机制。方法将50、100和200μg／ml的GSPE作用于人膀胱癌BIU87细胞24 h后，采用Hoechst 33258凋亡荧光染色观察细胞核形态改变，流式细胞术检测细胞凋亡率，RT-PCR及Western blot方法检测caspase-3和survivin mRNA及蛋白的表达变化。结果Hoechst 33258凋亡染色结果表明，GSPE可使BIU87细胞核呈现明显的凋亡形态学改变。流式细胞分析表明，GSPE可诱导BIU87细胞凋亡，0、50、100和200μg／mlGSPE对应的BIU87细胞的平均凋亡率分别为0．3、8．7、28．2和40．6％。RT-PCR及Western blot分析表明，随着GSPE浓度的增高，BIU87细胞caspase-3 mRNA及蛋白表达增多，survivin mRNA及蛋白表达减少，半定量分析显示各组间差别均有明显的统计学意义（P＜0．01）。结论GSPE可呈浓度依赖性诱导BIU87细胞凋亡。其机制可能与下调凋亡抑制基因survivin有关。第四部分丝裂霉素C联合葡萄籽提取物原花青素对人膀胱癌BIU87细胞的生长抑制作用目的探讨丝裂霉素C（mitomycin C，MMC）与GSPE联合应用对人膀胱癌BIU87细胞的生长抑制作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定MMC与GSPE单独和联合应用时对人膀胱癌BIU87细胞生长的抑制作用，并应用Chou-Talalay联合指数（combination index，CI）法定量分析药物之间的相互作用效果。结果MMC和GSPE单独应用时，BIU87细胞生长的抑制作用随药物浓度的增加而增加，中效浓度分别为15．422μg／ml和195．865μg／ml。MMC与GSPE联合应用时，作用效果表现为在低浓度（0＜fa＜37％）时呈协同作用（CI＜1），高浓度（37％＜fa＜100％）时呈拮抗作用（CI＞1），中效浓度为109．496μg／ml（其中MMC为8．111μg／ml，GSPE为101．385μg／ml）。结论MMC与GSPE相互作用的效果在低浓度时呈协同作用，高浓度时呈拮抗作用。