论文部分内容阅读
为了更好地开展萱草属植物杂交育种研究,摸清其染色体数目和形态特征,本试验对所收集的萱草属(Hemerocallisspp.)植物种质资源进行倍性鉴定与核型分析。结合染色体制片技术、流式细胞术及核型分析手段,对萱草属植物种质资源的染色体倍性、结构特征进行了分析,为今后我国萱草属植物细胞学遗传研究奠定了基础。(1)以‘茄子 1 号’(H0003 Hemerocallis‘Qiezi 1’,2n=2x=22)根尖为材料,分析了8—羟基喹啉溶液预处理温度与预处理时间、解离时间、解离后蒸馏水浸泡时间等因素对制片效果的影响,构建了萱草属植物染色体制片技术优化体系。结果表明,0.002 mol/L 8—羟基喹啉溶液最适预处理温度和时间分别为4℃和4～6h;1 mol/LHCl的最适解离时间为7～8min,解离后蒸馏水最适浸泡时间为10min,在此条件下染色体制片效果最佳。(2)本试验对所收集的82份萱草属材料进行了倍性鉴定。其中66份材料采用优化后的根尖染色体制片技术进行鉴定,发现‘子花’(H0002)等53份材料为二倍体(2n=2x=22),‘宿迁1号’(H0001)等10份材料为三倍体(2n=3x=33),‘海尔范1号’(H0091)等3份材料为四倍体(2n=4x=44)。利用流式细胞术对26份材料的倍性进行了鉴定,以‘大同金针’(H0006Hemerocallis ’Datong Jin Zhen’2n=2x=22)为对照材料,鉴定出‘小黄花’(H0007)等14份材料为二倍体(2n=2x=22),‘野生萱草2号’(H0015)等4份材料为三倍体(2n=3x=33),Hemerocallis×Chicago Apache(H0033)等8份材料为四倍体(2n=4x=44)。上述材料中,‘大同金针’(H0006)、‘小黄花’(H0007)、‘大荔黄花’(H0020)、‘淮安 1 号’(H0024)、‘骄阳’(H0060)、‘儿童节萱草’(H0076)、‘橙花’(H0089)、‘海尔范 1 号’(H0091)、‘美国红宝石’(H0093)和‘X-91’(H0144)这10份材料同时运用了染色体制片技术和流式细胞术进行染色体倍性鉴定,所得结果一致。(3)对34份不同的萱草属植物材料进行了核型分析,结果表明,34个材料的核型类型有2A、1B、2B、3B四种。其中‘淮安2号’(H0025)等5个材料的核型类型为2A,‘Hemerocallisthumberserii’(H0051)和‘荆州花’(H0130)的核型类型为 1B,‘宿迁1号’(H0001)等22个材料的核型类型为2B,‘大同金针’(H0006)等5个材料的核型类型为3B。由核型分析结果表明,34个材料的染色体类型以中部着丝点区(m)和近中部着丝点区(sm)为主,核型不对称系数在57.44%～68.40%之间,其中‘茶子花’(H0002)、‘夏日酒红’(H0085)与‘龙游红花’(H01 18)的核型公式相同,‘茄子1号’(H0003)与‘粉缎’(H0058)的核型公式相同,‘六月花’(H0005)、‘宿迁4号’(H0099)与‘丁庄大菜’(H0121)的核型公式相同,‘大同金针’(H0006)、‘冲里花1号’(H0018)、‘马莲’(H0088)和‘蟠龙花2号’(H0111)的核型公式相同,‘宿迁2号’(H0017)与‘摇篮曲’(H0065)的核型公式相同,‘线黄花1号’(H0027)、‘H.thunbergerii’(H0042)的核型公式相同,‘东庄黄花’(H0039)、‘蓝光 1’(H0062)与‘北京2号’(H0097)的核型公式相同,‘有毒Qiu.H’(H0069)、‘长嘴子花2号’(H0106)与‘荆州花’(H0130)的核型公式相同。(4)‘大同金针’(H0006)(2n=2x=22)、‘野生萱草3号’(H0026)(2n=3x=33)、‘小石城’(H0056)(2n=4x=44)进行自交、正交和反交。‘大同金针’(♂)ב大同金针’(♀)和‘小石城’(♂)ב野生萱草3号’(♀)两个组合分别授粉50朵,子房膨大率分别为48%和26%,而座果率均为4%。‘大同金针’(♂)X‘野生萱草3号’(♀)组合授粉花朵数为100朵,子房膨大率为57%,座果率为46%,且所有组合中只有本组合种子最终成苗,成苗率为71.61%。(5)对’大同金针‘(♂)ב野生萱草3号’(♀)组合所得杂种进行初步的真伪鉴定。利用19对在父母本间表现出多态性的EST-SSR引物,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳对其杂交后代进行检测分析,其中有3对引物在父本‘大同金针’所得条带中存在父本特异性条带,可用于鉴定真伪杂种。结果表明,有10个杂交后代初步鉴定为杂交真后代,所占比例为21.74%。