蔗糖果糖基转移酶基因SST1转入番茄的研究

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蔗果寡糖是寡糖中非常重要的一类,广泛存在于洋葱、香葱、牛蒡、菊芋、香蕉、小麦、黑麦、燕麦中,形式多种多样。其中菊粉中的蔗果寡糖的含量最丰富,占块茎干重70%—80%。天然存在的蔗果寡糖是由微生物或植物中具有果糖基转移活性的酶作用而产生的。目前生产的蔗果寡糖是将微生物中呋喃苷酶或果糖转移酶作用于蔗糖而制备获得。蔗果寡糖是超强双歧因子,能促进双歧杆菌增殖,而双歧杆菌是典型的有益菌,它可促进消化吸收,合成多种维生素,促进肠蠕动,分泌乳酸,抑制某些有害菌生成,防止便秘,增强人体免疫力等诸多功能。且摄入蔗果寡糖不会引起血糖值和胰岛素升高,对受胰岛素控制的肝糖原的合成也无影响,可以作为糖尿病和高血压患者的保健甜味剂。而人体内双歧杆菌的数目随着年龄的增长,环境污染及抗生素的使用等原因,含量逐渐下降。仅从维持肠道中微生物区系平衡出发,就应该人为地补充双歧杆菌。既然蔗果寡糖可以预防和调节多种疾病,并且对人体没有任何毒副作用,被认为营养型保健食品,已被许多国家批准使用于食品、化妆品、药品、饲料等。因此,可以通过加强蔗糖果糖基转移酶基因的表达来提高番茄果实中蔗果寡糖含量,培育出的富含蔗果寡糖的番茄果实具有很好的食用价值和发展前景。本研究以多代自交番茄品系(Lycopercicon esculentum Mill.)为实验材料,用10%的次氯酸钠消毒后培育无菌番茄苗,然后筛选出抗卡那霉素的最佳芽诱导分化培养基和转基因植株生根培养基,建立番茄高频再生转化体系。通过基因重组技术构建了含有蔗糖果糖基转移酶基因SST1表达载体pVCT-35SST,采用冻融法将SST1基因直接导入根癌农杆菌LBA4404中,并且通过农杆菌介导转化方法,获得了蔗果寡糖转基因番茄植株,转化植株在40mg·L-1Kan生根培养基中生根良好,PCR鉴定扩增出所需要的目标带,证明目的基因已经整合到基因组中。主要研究结果如下:1.建立了番茄的离体再生和遗传转化体系确定了适宜再生培养的外植体为番茄子叶,最佳芽分化培养基为MS+2.0mg·L-16-BA+0.2mg·L-1IAA,最佳生根培养基为MS+0.3mg·L-1IAA,适宜的芽分化卡那霉素抗性筛选压为Kan50mg·L-1。当农杆菌菌液OD值在0.3~0.5之间用液体MS培养基重悬后,最适合用来浸染番茄外植体。2.构建了蔗糖果糖基转移酶基因SST1的双元植物基因表达载体将来源于菊芋的SST1基因由35S启动子和nos终止子控制,插入载体pVCT2020中,构建成含有35S-SST1-Tnos基因表达盒的双元植物基因表达载体。经PCR扩增和酶切鉴定,表明构建的载体正确。3.获得了转SST1基因的番茄植株经农杆菌介导转化番茄子叶外植体,得到卡那霉素抗性植株。PCR鉴定结果表明,蔗糖果糖基转移酶基因SST1已经整合到番茄基因组中。
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