目的 探讨基质金属蛋白酶—9(Matrix metalloproteinase-9，MMP-9)在多发性硬化(Multiple Sclerosis，MS)的动物模型——实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)大鼠的脑脊髓中的表达和作用。 EAE是由CD4~+T淋巴细胞介导的，以中枢神经系统脱髓鞘、血脑屏障(blood-brain barrier，BBB)破坏及脑脊髓实质和血管周围单核淋巴细胞浸润为特征的实验动物的自身免疫性疾病，国外多采用Lewis大鼠作为研究对象，目前已被公认是研究多发性硬化的理想动物模型。基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases，MMPs)是一类肽链内切酶，包括胶原酶类、明胶酶类、间质溶解素类等等。已有研究表明此类酶家族具有破坏血脑屏障，降解细胞外基质(extracellular matrix，ECM)，以及降解髓鞘碱性蛋白的作用。 国外学者研究发现中枢神经系统的小胶质细胞、星型胶质细胞、血管内皮以及T细胞、巨噬细胞可分泌MMPs，而且在EAE模型及MS的病灶及周围有MMPs的表达上升，尤其是明胶酶类的MMP—9。本实验采用EAE非敏感品系Wistar大鼠建立EAE模型，并检测MMP--9在此模型脑脊髓中的表达，以阐明利用Wistar大鼠建立EAE模型的可行性，同时探讨MMP—9在EAE发病中的作用。 材料和方法 1、实验动物、试剂及仪器：雌性Wistar大鼠，体重180-220g；雌性豚鼠，体重250-350g。Wistar大鼠随机分为EAE模型组、完全福氏佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)组及生理盐水(NS)组共3组。山羊抗大鼠MMP—9抗体、兔抗山羊SP试剂盒、完全福氏佐剂等试剂以及超声细胞粉碎仪、石蜡包块切片机、显微镜等仪器已备。 2、建立EAE模型：应用豚鼠脑脊髓匀浆作为抗原与CFA混匀于Wistar大鼠颈背澎左大学硬士学世绘戈部皮下注射0.4ml，辅以百日咳杆菌原液〔含1 x 10‘。个菌)背部皮内注射诱导建立EAE模型，同时CFA组及NS组于皮下分别注射CFA(0.4ml)、Ns(0.4ml)作为对照组。并在首次抗原注射后第9天予以10%豚鼠脊髓匀浆(gulnea pigspina一e。记hom。genate，GPseH)或Ns皮下注射，在第12天观察迟发性变态反应结果。3、采用免疫组化方法检测发病后3天内、6一8天、2周不同时间段EAE大鼠组(评分2一3分)脑脊髓中卿P一9的表达，并与CFA组及NS对照组的检测结果比较。结果1、利用豚鼠脑脊髓匀浆加上CFA、百日咳杆菌原液的注射方法成功诱导了Wistar大鼠的EAE模型。EAE发病率29.5%，发病时间多在抗原免疫后第8一12天，反应病情严重程度的第14天平均临床症状评分1.94士0.87，而单纯CFA、NS注射组无动物发病。第12天观察皮试结果显示EAE组皮丘直径大于CFA组及NS组，结果有统计学差异。HE及weil髓鞘染色显示EAE大鼠脑脊髓血管周围单核淋巴样细胞浸润性炎症及脱髓鞘改变。2、姗P一9半定量免疫组化分析显示EAE大鼠脑脊髓内有特异的姗P一9的表达。发病延3天在脑脊髓白质内浸润的单核淋巴样细胞，以及细胞外间质、脑脊髓膜、室管膜及脑脊髓小血管壁上有较多阳性MMP一9表达。而发病后6一8天阳性单核淋巴样细胞明显减少，血管及间质咖P一9表达下降。而CFA及NS组仅少量MMP一9表达。统计分析显示不同组别、不同病程阶段MMP一9表达有统计学差异。发病簇3天的姗P一9表达高于发病后6一8天(P<0.05)及发病后2周(P<0.01)。结论1、采用EAE非敏感品系Wistar大鼠成功建立EAE模型，但wistar大鼠发病率低于国外文献报道LewiS大鼠的发病率。同时从病理角度揭示EAE有类似于MS的表现，即存在血管周围淋巴样细胞浸润以及脱髓鞘改变。2、EAE大鼠脑脊髓的脑脊膜、单核淋巴样细胞有特异的MMP一9的表达，且发病早期姗P一9阳性细胞率高于发病后期、恢复期及对照组，结果有统计学差异，提示MMP一9与EAE发病有关，可能参与EAE发病。对EAE发病机理的深入研究将有助于对许多神经系统自身免疫相关疾病的发病机理和治疗方面的探索。