目的本论文旨在探究赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSD1)与自噬体蛋白LC3在卵巢癌组织中的表达以及相互关系,并探讨LSD1在人卵巢癌细胞自噬中的作用及其具体调控机制,为探寻卵巢癌发病机理及其分子靶向治疗提供一种新的思路。方法1、利用生物信息学,通过卵巢癌患者的癌症基因组图谱(TCGA)数据库、Oncomine数据库、Kaplan-Meier绘图仪等分析软件对卵巢癌组织中LSD1和LC3基因的表达进行分析。2、通过基因表达谱交互分析(GEPIA)软件对LSD1与LC3基因表达的相关性进行分析。3、利用GST-LC3B pulldown实验检测LSD1的SWIRM结构域与卵巢癌细胞内的自噬体蛋白LC3的相互作用。4、通过免疫荧光染色法检测LSD1与LC3在卵巢癌细胞内的定位情况。5、采用蛋白质免疫共沉淀法检测卵巢癌HO8910和SKOV3细胞内LC3蛋白的甲基化水平,以及LSD1对LC3甲基化的影响。6、在蛋白合成抑制剂cycloheximide(CHX)处理条件下,采用免疫印迹法检测LSD1敲低对LC3蛋白稳定性的影响。7、在溶酶体抑制剂Chloroquine(CQ)或蛋白酶体抑制剂MG132处理条件下,采用免疫印迹法检测LSD1调节LC3的具体途径。8、利用免疫印迹法检测LC3对LSD1去甲基化酶活性及表达的影响。结果1、生物信息学分析结果显示,卵巢癌患者组织中LSD1与LC3基因表达量呈负相关,且LSD1主要高表达在卵巢癌组织而不是周边的正常组织中。同时发现LSD1高表达患者预后较差,而高表达LC3的患者预后较好。2、GST-LC3B pulldown结果显示,LSD1与自噬体蛋白LC3相互作用,并鉴定出LSD1的SWIRM结构域是与LC3结合的位点,而不是位于LC3 interactingregion(LIR)基序。3、免疫荧光染色结果显示,LSD1与LC3在卵巢癌HO8910细胞核内共定位。4、蛋白质免疫共沉淀结果显示,卵巢癌HO8910和SKOV3细胞中LC3发生了甲基化修饰,且去甲基化酶LSD1能够介导LC3去甲基化。5、敲低LSD1显著增加卵巢癌HO8910和SKOV3细胞中LC3蛋白的表达水平,且与自噬-溶酶体途径有关;同时发现LC3可负调节LSD1的去甲基化酶活性。结论1、生物信息学结果提示,卵巢癌患者组织中LSD1与LC3基因表达量呈负相关,LSD1主要高表达于卵巢癌组织,且LSD1高表达的患者预后较差,而高表达LC3的患者预后较好。2、LSD1与自噬体蛋白LC3相互作用,并介导LC3去甲基化修饰,进而影响LC3蛋白的稳定性,从而调节卵巢癌细胞自噬的过程。本研究揭示了一条新的LSD1调控卵巢癌细胞自噬的信号通路。