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目的:在糖尿病的自然病程中血浆葡萄糖和胰岛素浓度的异常往往是同时存在的,观察不同浓度葡萄糖和胰岛素对Colon26肿瘤细胞分泌IL-6蛋白的影响及二者之间是否存在相互作用,以探讨葡萄糖、胰岛素经IL-6途径在小鼠结肠癌发生发展中的作用。
方法:所有实验均在体外培养的小鼠Colon26肿瘤细胞上进行。根据所用培养液含葡萄糖、胰岛素浓度的不同,实验所用细胞共分12组A组RPMI1640培养液(对照组);B组RPMI1640+5mmol/L葡萄糖;C组RPMI1640+10mmol/L葡萄糖;D组RPMI1640+25mmol/L葡萄糖;E组RPMI1640+5uIU/ML胰岛素;F组RPMI1640+25uIU/MI胰岛素;G组RPMI1640+125uIU/ML,胰岛素;H组RPMI1640+5mmol/L葡萄糖+5uIU/ML胰岛素;K组RPMI1640+5mmol/L葡萄糖+125uIU/ML胰岛素;L组RPMI1640+25mmol/L葡萄糖+125uIU/ML胰岛素;M组RPMI1640+25mmol/L葡萄糖+5uIU/ML胰岛素;N组RPMI1640+25mmol/L葡萄糖+1.25uIU/ML胰岛素。每种处理因素设3个复孔,培养48小时后收集培养液上清,ELISA法测IL-6蛋白浓度,收集细胞后抽提总RNA,RT-PCR同时扩增IL-6和内参照β-action目的片段,琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物。整个实验过程在合适的时间重复两次。统计学分析采用采用t检验和单因素方差分析,显著性标准为P<0.05。
结果:
1.不同浓度的葡萄糖和胰岛素对Colon26肿瘤细胞培养上清IL-6蛋白分泌的影响
1.1不同浓度的葡萄糖对Colon26肿瘤细胞培养上清中IL-6蛋白浓度的影响。D组(培养液含有25mmol/L的葡萄糖)上清中IL-6蛋白浓度(27.70±1.53)明显高于A组(18.33±2.52),差异有显著性;而B组、C组(培养液分别含有5mmol/L,10mmol/L的葡萄糖)上清中IL-6蛋白浓度(19.33±2.31,22.67±0.58)与A组相比无显著性差别。
1.2不同浓度的胰岛素对Colon26肿瘤细胞培养上清中IL-6蛋白浓度的影响。E、F、G组(培养液中分别含有5uIU/mL、25uIU/mL、125uIU/mL 胰岛素)上清中IL-6蛋白浓度(19.67±1.53,21.33±4.04,21.67±2.08)与A组相比无显著性差别。
1.3不同浓度的葡萄糖、胰岛素对Colon26肿瘤细胞培养上清中IL-6蛋白浓度的影响。L、M、N组(培养液均含有25 mmol/L的葡萄糖)上清中IL-6蛋白浓度(27.67±2.52,27.33±2.08,27.33±1.53)均明显高于A组,差异有显著性,而H、K组(培养液均含有5mmol/L葡萄糖)的IL-6蛋白浓度(20.33±1.53,22.33±2.08)与A组相比无显著性差别。
2.不同浓度的葡萄糖和胰岛素对Colon26肿瘤细胞培养上清中IL-6mRNA表达的影响
2.1不同浓度的葡萄糖对Colon26肿瘤细胞培养上清中IL-6mRNA表达的影响。D组(培养液含有25mmol/L的葡萄糖)上清中IL-6mRNA表达(0.560±0.011)明显高于A组(0.406±0.012),差异有显著性;而B组、C组(培养液分别含有5mmol/L,10mmol/L的葡萄糖)上清中IL-6mRNA表达(0.413±0.031,0.426±0.001)与A组相比无显著性差别。
2.2不同浓度的胰岛素对Colon26肿瘤细胞培养上清中IL-6mRNA表达的影响。E、F、G组(培养液中分别含有5uIU/mL、25uIU/mL、125uIU/mL胰岛素)上清中IL-6mRNA表达分别(0.416±0.002,0.422±0.013,0.426±0.016)与A组(0.406±0.012)相比无显著性差别。
2.3不同浓度的葡萄糖、胰岛素对Colon26肿瘤细胞培养上清中IL-6mRNA表达的影响。L、M、N组(培养液均含有25 mmol/L的葡萄糖)上清中IL-6蛋白浓度(0.560±0.011,0.560±0.011,0.563±0.002)均明显高于A组,差异有显著性,而H、K组(培养液均含有5mmol/L葡萄糖)的IL-6蛋白浓度(0.420±0.001,0.426±0.002)与A组相比无显著性差别。
结论:
1.高浓度葡萄糖能够增加Colon26肿瘤细胞培养上清IL-6蛋白的分泌和IL-6mRNA的表达。高浓度的葡萄糖在转录水平影响Colon26肿瘤细胞IL-6蛋白的分泌。
2.不同浓度的胰岛素对Colon26肿瘤细胞培养上清IL-6蛋白的分泌和IL-6mRNA的表达未见影响。
3.糖尿病人群中结肠癌的进展快、死亡率较非糖尿病人群高,并且与糖尿病病程及结肠癌的分期等关系密切,IL-6可能发挥了重要作用。