线粒体融合基因2(Mfn2)在骨肉瘤增殖和凋亡中的功能及其分子机制研究

来源 :三峡大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:li9599
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:线粒体融合蛋白2(mitofusin-2,Mfn2)是线粒体融合蛋白家族的重要一员,在包括骨肉瘤MG63细胞的大多数肿瘤细胞中呈低表达。本研究旨在通过观察Mfn2对人骨肉瘤细胞在体外的增殖、凋亡的影响,进一步揭示该基因在肿瘤细胞增殖、凋亡的作用和为骨肉瘤的治疗提供一定的理论基础。方法:(1)免疫组化分析人骨肉瘤组织和其癌旁组织中Mfn2的表达情况;再分别检测细胞株与骨肉瘤细胞株在mRNA和蛋白水平检测Mfn2的表达情况。(2)构建pIRES-flag-Mfn2的质粒,将质粒转染骨肉瘤细胞株MG63细胞,筛选出表达flag-Mfn2的细胞克隆。(3)骨肉瘤细胞高表达Mfn2后,细胞增殖凋亡检测:MTT检测细胞增殖;倒置荧光显微镜或电镜观察细胞形态;流式细胞学检测细胞周期western blotting检测相关凋亡蛋白的表达,如PARP,caspase3等;DNA片段化检测。(4)培养表达flag-Mfn2的细胞株,收取细胞并裂解,用免疫共沉淀法纯化出flag-Mfn2,进行蛋白质质谱测序,根据质谱结果鉴定与Mfn2相互作用的细胞增殖凋亡相关的蛋白;研究分析其引起骨肉瘤细胞增殖减慢、凋亡可能的机制。结果:(1)Mfn2基因在骨肉瘤细胞中的表达明显低于正常组织细胞中的表达,骨肉瘤组织比其癌旁组织中Mfn2表达降低。(2)成功构建人pIRES-Mfn2重组质粒,重组质粒pIRES-Mfn2转染入骨肉瘤MG63细胞,RT-PCR和Western blot检测Mfn2的高表达。(3)重组质粒pIRES-Mfn2转染入骨肉瘤MG63细胞后,克隆形成试验显示细胞数目减少,增殖抑制;MTT示Mfn2高表达的细胞增殖率降低,抑制率升高;流式细胞仪分析细胞周期:Mfn2高表达的细胞G1期细胞增多,S期及G2期细胞减少,细胞被阻滞在G1期:western blot检测凋亡相关蛋白PARP的表达:Mfn2高表达的细胞CleavedPARP表达增多,诱导细胞凋亡。(4)免疫共沉淀结合质谱分析、鉴定与Mfn2相互作用的细胞增殖凋亡的蛋白: caspase-14、PARP和14-3-3蛋白。结论:本研究初步推测Mfn2可能为一种新的抑癌基因,并通过观察Mfn2对人骨肉瘤细胞在体外的增殖、凋亡的影响,进一步揭示该基因在肿瘤细胞增殖、凋亡的作用和为骨肉瘤的治疗提供一定的理论基础。
其他文献
支配咽肌的运动神经元位于疑核,控制凝核的前运动神经元位于孤束核.孤束核中的前运动神经元在控制吞咽运动中起着重要的作用.但支配咽肌的前运动神经元位于孤束核的什么部位
非亚诗歌的一个突出特征,便是其中的死亡观,与此相联系的,则是诗人视生活本身为虚无、混乱和孤独挣扎的场域。在具体的诗歌表达中,体现为诗人倚重具体生活经验,从具象的经验
<正>11月28日,我国《扩大水资源税改革试点实施办法》正式发布。实施办法规定,自12月1日起,我国将目前在河北省开展的水资源税改革试点,扩大至北京、天津、山西、内蒙古、河
以固体火箭发动机中的玻璃纤维复合材料壳体/绝热层试件的脱粘缺陷为研究对象,利用脉冲闪光灯热激励方式对试件进行加热,用红外热像仪实时监测试件的表面温度场,由表面温度差
目的:探讨中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)与宫颈癌FIGO分期及病理特征的关系。方法:收集2011年1月至2014年9月在本院住院,经病理学证实的宫颈癌
目的 探讨胎膜早破经阴道分娩的临床护理路径的应用效果。方法 选取82例胎膜早破产妇作为研究对象,按临床护理方法的不同将其分为对照组与试验组,对照组产妇实施常规护理干预
楔状缺损是发生在牙颈部硬组织的缺损,好发于中老年人。其病因学的研究,自20世纪80年代有了很大的进展。目前普遍的观点认为,楔状缺损是力、机械磨损及酸蚀和时间等因素共
结直肠癌(colorectal carcinoma,CRC)是目前世界第三大常见恶性肿瘤,同时为癌症死亡第四大原因。每年,全球范围内有多于100万的结直肠癌新增病例,死亡人数超过70万,其发病率
目的:探究原发性肝癌患者行肝部分切除术后的生存及预后情况,阐述原发性肝癌术后患者的预后相关影响因素,以期能为肝癌患者的临床治疗及预后评估提供理论依据。方法:回顾性分