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目的:线粒体融合蛋白2(mitofusin-2,Mfn2)是线粒体融合蛋白家族的重要一员,在包括骨肉瘤MG63细胞的大多数肿瘤细胞中呈低表达。本研究旨在通过观察Mfn2对人骨肉瘤细胞在体外的增殖、凋亡的影响,进一步揭示该基因在肿瘤细胞增殖、凋亡的作用和为骨肉瘤的治疗提供一定的理论基础。方法:(1)免疫组化分析人骨肉瘤组织和其癌旁组织中Mfn2的表达情况;再分别检测细胞株与骨肉瘤细胞株在mRNA和蛋白水平检测Mfn2的表达情况。(2)构建pIRES-flag-Mfn2的质粒,将质粒转染骨肉瘤细胞株MG63细胞,筛选出表达flag-Mfn2的细胞克隆。(3)骨肉瘤细胞高表达Mfn2后,细胞增殖凋亡检测:MTT检测细胞增殖;倒置荧光显微镜或电镜观察细胞形态;流式细胞学检测细胞周期western blotting检测相关凋亡蛋白的表达,如PARP,caspase3等;DNA片段化检测。(4)培养表达flag-Mfn2的细胞株,收取细胞并裂解,用免疫共沉淀法纯化出flag-Mfn2,进行蛋白质质谱测序,根据质谱结果鉴定与Mfn2相互作用的细胞增殖凋亡相关的蛋白;研究分析其引起骨肉瘤细胞增殖减慢、凋亡可能的机制。结果:(1)Mfn2基因在骨肉瘤细胞中的表达明显低于正常组织细胞中的表达,骨肉瘤组织比其癌旁组织中Mfn2表达降低。(2)成功构建人pIRES-Mfn2重组质粒,重组质粒pIRES-Mfn2转染入骨肉瘤MG63细胞,RT-PCR和Western blot检测Mfn2的高表达。(3)重组质粒pIRES-Mfn2转染入骨肉瘤MG63细胞后,克隆形成试验显示细胞数目减少,增殖抑制;MTT示Mfn2高表达的细胞增殖率降低,抑制率升高;流式细胞仪分析细胞周期:Mfn2高表达的细胞G1期细胞增多,S期及G2期细胞减少,细胞被阻滞在G1期:western blot检测凋亡相关蛋白PARP的表达:Mfn2高表达的细胞CleavedPARP表达增多,诱导细胞凋亡。(4)免疫共沉淀结合质谱分析、鉴定与Mfn2相互作用的细胞增殖凋亡的蛋白: caspase-14、PARP和14-3-3蛋白。结论:本研究初步推测Mfn2可能为一种新的抑癌基因,并通过观察Mfn2对人骨肉瘤细胞在体外的增殖、凋亡的影响,进一步揭示该基因在肿瘤细胞增殖、凋亡的作用和为骨肉瘤的治疗提供一定的理论基础。