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黑色素瘤（malignant melanoma,MM）是一种最具侵袭性的皮肤肿瘤,传统治疗方法如手术、化疗、放疗的治疗效果在部分人群中疗效欠佳。近几年中药单体作为我国的传统医药不仅种类丰富且具有广泛的生物活性,已经成为肿瘤研究领域一个新的突破口。氯化两面针碱（nitidine chloride,NC）是在两面针的根中分离得到的主要活性成分之一,性辛苦、毒性弱,具有多种生物活性,包括抗炎症、抗病毒、抗肿瘤、镇痛、改善循环等。NC对黑色素瘤的作用及机制报道较少。本实验拟将NC作用于人黑色素瘤A375细胞移植瘤,观察其对裸鼠移植瘤的作用及对人黑色素瘤A375细胞凋亡的影响。目的:1.探究氯化两面针碱对裸鼠移植瘤的影响。2.探究氯化两面针碱对人黑色素瘤A375细胞凋亡的影响。方法:1.倒置显微镜（×100,×200）下观察黑色素瘤A375细胞移植前的生长情况及形态变化。2.制备裸鼠移植瘤模型,观察裸鼠皮下成瘤率,计算肿瘤抑制率,脾指数（脾指数=脾脏质量/裸鼠体重）。3.通过向裸鼠尾静脉注射氯化两面针碱,观察所产生的毒性反应及其生长发育情况,评价NC急性毒性。4.RT-q PCR检测不同浓度NC作用移植瘤后,Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9基因的表达。5.Western blot检测不同浓度NC作用移植瘤后,Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白的表达。6.应用免疫组织化学方法检测不同浓度NC作用移植瘤后,Bax、Bcl-2、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9阳性细胞的表达。7.应用HE染色方法检测不同浓度NC作用移植瘤后,在电镜下观察移植瘤细胞核、细胞质的变化。结果:1.倒置显微镜（×100,×200）下观察示:黑色素瘤A375细胞移植前生长良好,大多数呈棱形或多角形,大小均匀,胞浆饱满,折光性好,边缘光滑清晰。2.制备裸鼠移植瘤模型结果显示:将浓度为10~7/ml的细胞悬液注射到裸鼠右腋下,观察裸鼠皮下成瘤时间约为14天,成瘤率为100%。肿瘤重量抑制率（IR）=（对照组裸鼠体重均值-治疗组裸鼠体重均值）/对照组裸鼠体重均值×100%。肿瘤体积抑制率（IR）=（对照组裸鼠肿瘤体积均值-治疗组裸鼠肿瘤体积均值）/对照组裸鼠肿瘤体积均值×100%,经不同浓度NC（0 mg/kg,5 mg/kg,10 mg/kg,20 mg/kg）处理裸鼠黑色素瘤后,肿瘤重量的抑制率分别为10.27%,11.27%,14.71%;肿瘤体积的抑制率分别为39.81%,40.32%,57.92%。裸鼠经不同浓度NC（0 mg/kg,5mg/kg,10 mg/kg,20 mg/kg）处理后,脾指数分别为13.84±1.55%、9.88±0.84%、9.91±0.70%、11.49±1.18%,经两两比较,各实验组与阴性对照组间有显著统计学差异（P＜0.05）。3.向裸鼠尾静脉注射NC的结果示:LD50值为19.999 mg/kg,LD50的95%平均可信区间为（19.999±2.696）mg/kg,LD50的99%平均可信区间为（19.999±3.534）mg/kg。4.RT-q PCR检测结果显示:Bax在m RNA水平的相对表达量依次为2.33±0.17、3.36±0.31、3.85±0.08。经两两比较,各实验组与阴性对照组间有显著统计学差异（P＜0.05）;Bcl-2在m RNA水平的相对表达量依次为0.93±0.02、0.67±0.02、0.44±0.03。经两两比较,各实验组与阴性对照组间有显著统计学差异（P＜0.05）;Cleaved Caspase-3在m RNA水平的相对表达量依次为1.77±0.28、2.43±0.55、2.87±0.26,经两两比较,各实验组与阴性对照组间有显著统计学差异（P＜0.05）;Cleaved Caspase-9在m RNA水平的相对表达量依次为1.49±0.17、2.12±0.23、2.86±0.18,经两两比较,各实验组与阴性对照组间有显著统计学差异（P＜0.05）。5.Western blot检测结果示:Bax的相对蛋白表达量依次为0.10±0.01;0.25±0.02;0.48±0.02;0.75±0.01,经两两比较,各实验组与阴性对照组间均有显著的统计学差异（P＜0.05）;Bcl-2的相对蛋白表达量依次为0.99±0.05;0.76±0.02;0.66±0.06;0.47±0.01,经两两比较,各实验组与阴性对照组间均有显著的统计学差异（P＜0.05）;Cleaved Caspase3的相对蛋白表达量依次为0.51±0.01;0.73±0.01;1.01±0.02;1.28±0.02,经两两比较,各实验组与阴性对照组间均有显著的统计学差异（P＜0.05）;Cleaved Caspase9的相对蛋白表达量依次为0.30±0.01;0.59±0.01;0.95±0.03;1.03±0.04,经两两比较,各实验组与阴性对照组间均有显著的统计学差异（P＜0.05）。6.免疫组织化学方法检测结果显示:NC组中黑色素瘤A375细胞的Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase3、Cleaved Caspase9阳性细胞表达水平均有不同程度的改变。NC浓度越高,Bax、Cleaved Caspase3、Cleaved Caspase9阳性细胞表达越高,Bcl-2表达越低。7.HE染色方法检测经NC处理后电镜下观察肿瘤细胞核、细胞质的变化。阴性对照组（生理盐水+DMES）细胞形态无明显改变,细胞较密集,可见坏死范围小,完整性好。氯化两面针碱组（NC组）的细胞形态有明显改变,有不同程度的坏死,完整性差。结论:1.在一定时间和浓度范围内,氯化两面针碱可对裸鼠移植瘤的生长存在一定程度抑制作用,呈剂量依赖性。2.在一定时间和浓度范围内,氯化两面针碱可诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡,呈剂量依赖性。