金黄色葡萄球菌是典型的革兰氏阳性条件致病菌,在环境中分布广泛。近年来,金黄色葡萄球菌已成为主要的临床感染菌,医院内每年都会有数以百万的金黄色葡萄球菌感染发生。金黄色葡萄球菌感染能够引发的症状有食物中毒、溃疡、心内膜炎、骨髓炎、肺炎等,甚至引起败血性休克而导致死亡。金黄色葡萄球菌之所以能引起如此多的病症,是因为它能分泌多种致病因子,其中a溶血素是非常重要的毒素之一。在感染过程中,这些毒性因子受到了广泛而精细的调控,从而帮助细菌响应和适应各种复杂的环境。这些调控因子包括二元信号系统、转录调控蛋白和非编码RNA等。我们在前期研究LuxS/AI-2信号系统时,发现了一个与luxS反向重复的sRNA。Northern blot和RACE分析证实,这个sRNA全长为345nt,并将其命名为ArtR。序列分析和RT-PCR等实验表明,ArtR是金黄色葡萄球菌中所特有的一种sRNA,它的表达受到Agr群体感应系统的抑制。但是这种抑制效应不是通过Agr群体感应系统常用的RNAIII来实现,而是直接通过AgrA蛋白与ArtR的启动子相互作用来实现。基因敲除实验发现,ArtR的缺失影响了金黄色葡萄球菌α溶血素的水平。而凝胶阻滞分析实验证明,ArtR并不能直接结合α溶血素的mRNA。于是我们寻找了a溶血素相关的转录因子,发现ArtR突变株中α溶血素的抑制因子SarT的水平有所升高。通过凝胶阻滞分析和RNA酶解等实验我们证实ArtR通过与sarT5’UTR上的一段区域与相互作用,促进了RNase Ⅲ对sarT mRNA的降解。这项研究鉴定了金黄色葡萄球菌属中一个新的毒性相关的sRNA,并且阐明它是通过与转录因子mRNA相互作用来实现其调控过程的。sRNA调控不仅局限于sRNA与靶RNA的相互作用,可能有很多蛋白质参与其中。但是由于技术的限制,对金黄色葡萄球菌中sRNA相关的蛋白质知之甚少。我们通过前期的研究工作成功建立了利用tRNA融合RNA适配体(简称tRSA)进行sRNA蛋白质pull-down的实验体系,选取了金黄色葡萄球菌中重要的sRNA——RNAIII,对其结合蛋白进行钓取。实验发现tRSA标记的RNA能够较好被链霉亲和素磁珠捕获,用这个体系成功钓取了81个能够结合RNAⅢ的候选蛋白质。我们进一步通过蛋白质表达、凝胶阻滞分析验证了这些候选蛋白与RNAⅢ的结合能力。选取的9个蛋白质中,RNase Ⅲ对RNAⅢ具有降解活性,7个蛋白(CshA、RNase J2、Era、Hu、WalR、PyK、FtsZ)可以结合RNAⅢ,PflcA没有检测出结合能力。同时选取了两个pull-down未鉴定出的,但属于RNA降解体的蛋白,发现它们并不能够直接结合RNAⅢ。该实验表明金黄色葡萄球菌中可能有很多蛋白质结合RNAⅢ,并有可能参与它的调控过程；tRSA的体系能够很好的运用于金黄色葡萄球菌sRNA结合蛋白的pull-down实验,并且成功鉴定出部分RNAⅢ的结合蛋白质。深入研究这些蛋白质对于sRNA调控以及金黄色葡萄球菌致病性调控的作用,能够深化我们对细菌sRNA调控机制和复杂网络的认识。