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子宫颈癌在全球妇女癌症死亡率中位居第二位。在一些发展中国家甚至居于首位。在发达国家，其发生率明显下降，很大程度上归因于对宫颈癌前病变的早期诊断和治疗。在发展中国家，由于宫颈筛查工作不完善，女性对宫颈疾病的忽视，致使我国宫颈癌的发生率是发达国家的6倍。大量的研究发现宫颈癌的发生与人乳头瘤病毒（Humanpapillomavirus HPV）的关系非常密切，在99.7%的宫颈癌标本中可检出不同型别的HPV。约80%的宫颈癌与4种类型（16、18、31和45型）的HPV感染有关，其中，50%的宫颈癌与HPV16感染相关。因此针对HPV16型的宫颈癌疫苗大量涌现出来。目前的疫苗主要有预防性疫苗和治疗性疫苗。预防性疫苗均建立在HPV衣壳蛋白L1、L2，目的在于针对HPV感染产生良好的中和抗体，特别是粘膜分泌型lgA，以阻断HPV感染。该疫苗临床试验结果非常令人鼓舞，预示着开发有效的预防性疫苗非常可能。治疗性疫苗：是诱导细胞免疫应答，使免疫系统识别和攻击感染HPV的细胞和肿瘤组织，由于高危型HPV的E6、E7蛋白是公认的转化蛋白及肿瘤排斥抗原，在宫颈癌组织中有较高的表达，故成为研究最多的靶抗原。在抗肿瘤免疫中细胞免疫应答比体液免疫应答更重要，在抗肿瘤的细胞免疫应答中，T细胞、尤其是CD8＋T（CTLs）介导的细胞毒效应发挥着主要作用。CTLs在杀灭肿瘤细胞时识别的是和MHC I类分子结合的CTL<WP=63>表位，决定了用于免疫治疗的HPV表位肽必须符合特定的MHC I类分子表型。而本研究从HPV16型的E1、E2、E4、E5、E6、E7、L1、L2中选取了8个CTL表位，涵盖HLA-A021、A11、A24、A2402限制性表位，这些HLA型别是国内覆盖最广的型别，可扩大疫苗在不同MHC背景下的应用范围。我们成功地构建了多表位疫苗，与TAT、Chap10、TrxA重组成融合蛋白，TAT-HPV、Chap10-HPV、TrxA-HPV。本文的工作有如下几部分：第一部分：HPV16型宫颈癌多表位疫苗的设计根据文献以及蛋白质表位测试软件，选取了HPV16型的如下表位：E1 （272-286）、E2 （15-29）、E4 （8-21）、E5 （4-20）、E6 （60-70）、E7 （8-23）、L1（113-127）、L2（350-367）。这些表位涵盖国内覆盖最广的HLA型别，经过Genbank数据库分析它们具有高度的保守性。我们将些表位按不同的排列顺序进行组合，经软件PROTEIN分析后选取较为适合的排列组合。第二部分：获得HPV16型多表位抗原基因采用五轮PCR合成了HPV16型多表位抗原基因（简称HPV0）。为了克隆的需要，该基因5’端带有EcoR I和Bgl II，3’端带有BamH I和Hind III酶切位点。利用DNA序列自动分析仪进行测序，证实该合成的序列与设计相符。第三部分：HPV（无HisTag）在表达载体pET28a中的构建与表达通过PCR在HPV0 5’端加Nco I，3’端加载终止密码子及Hind III酶切位点，合成特异性DNA片段HPV1。将HPV1片段亚克隆至pET28a空质粒中。利用DNA序列自动分析仪进行测序，证实该合成的序列与设计相符。培养表达菌。IPTG诱导3h，收集细菌。SDS-PAGE分析表达产物。发现无目的蛋白表达。第四部分：TAT-HPV（含有HisTag）在表达载体pET28a中的构建与表达 <WP=64>将HPV0片段亚克隆至pET28a-TAT重组质粒中TAT基因下游。利用DNA序列自动分析仪进行测序，证实该合成的序列与设计相符。培养表达菌。IPTG诱导3h，收集细菌。SDS-PAGE分析表达产物。表达一条分子量为17KD左右的蛋白带。Weston-Blot鉴定结果呈现阳性。第五部分：Chap10-HPV（含有HisTag）在表达载体pET28a中的构建与表达将HPV0片段亚克隆至pET28a-Chap质粒中Chap基因下游。利用DNA序列自动分析仪进行测序，证实该合成的序列与设计相符。培养表达菌。IPTG诱导3h，收集细菌。SDS-PAGE分析表达产物。表达一条分子量为27KD左右的蛋白带。Weston-Blot鉴定结果呈现阳性。第六部分：TrxA-HPV（含有HisTag）在表达载体pET32a中的构建与表达将HPV0片段亚克隆至pET32a-TrxA质粒中TrxA基因下游。利用DNA序列自动分析仪进行测序，证实该合成的序列与设计相符。培养表达菌。IPTG诱导3h，收集细菌。SDS-PAGE分析表达产物。表达一条分子量为28KD左右的蛋白带。Weston-Blot鉴定结果呈现阳性。综上所述，为了预防及治疗HPV16型感染与HPV16型感染相关的子宫颈癌，我们成功地构建并表达了四种蛋白，为今后的科学研究奠定基础。