第一部分：SNORA42在食管癌组织、外周血和细胞系中的表达　　目的：研究SNORA42（核仁小RNA42）在食管癌组织、外周血和食管癌细胞系中的表达。并分析SNORA42表达水平与食管癌患者临床病理参数的相关性。　　方法：　　1.应用 RT-qPCR法检测食管癌组织及癌旁组织中 SNORA42的表达，并分析SNORA42表达水平与食管癌患者临床病理参数的相关性。　　2.应用RT-qPCR法检测正常人和食管癌患者外周血中SNORA42的表达。　　3.应用RT-PCR和RT-qPCR法检测食管癌细胞系中SNORA42的表达。　　结果：　　1.RT-qPCR分析结果显示，与正常食管上皮组织相比，食管癌组织中SNORA42表达上调（P<0.01）。食管癌组织中SNORA42的表达水平与患者的年龄、性别、肿瘤分化程度和肿瘤大小无关（P>0.05），而与肿瘤的TNM分期和淋巴结浸润有关（P<0.05）。　　2.RT-qPCR法分析结果显示，与正常人血清相比，食管癌患者血清中SNORA42表达上调（P<0.05）。　　3.RT-qPCR和RT-PCR法分析结果显示，与人正常食管上皮永生化细胞相比，KYSE180、Eca109、KYSE30、KYSE510和TE-13细胞中SNORA42的表达水平显著升高，而KYSE170、YES2和TE-1细胞中SNORA42的表达水平略有升高。　　第二部分：SNORA42对食管癌细胞生物学行为的影响及其作用机制研究　　目的：研究SNORA42对食管癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响。并探讨SNORA42在食管癌细胞中发挥作用的可能机制。　　方法：　　1.应用 MTS方法、Transwell迁移和侵袭实验检测敲低或过表达SNORA42后对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。　　2.应用Western blotting检测过表达SNORA42基因表达后对周期相关蛋白、转移相关蛋白表达的影响。　　3.应用ELISA法检测过表达或敲低SNORA42基因表达后对食管癌细胞侵袭转移相关蛋白表达的影响。　　4.应用RNA Pulldown法检测食管癌细胞中与SNORA42直接相互作用的蛋白，并用质谱分析所得差异条带。　　5.应用RT-qPCR法检测食管癌组织及癌旁组织中DHX9 mRNA的表达。　　6.应用 western blot法验证过表达或敲低 SNORA42基因表达后DHX9和SND1蛋白表达水平的变化。应用RT-qPCR法检测食管癌细胞中敲低或过表达SNORA42后DHX9 mRNA表达水平的变化。　　7.应用western blot法验证在食管癌细胞中过表达或敲低SNORA42后DHX9相关基因表达水平的变化。　　8.应用MTS方法、Transwell迁移和侵袭实验检测在食管癌细胞中敲低DHX9对食管癌细胞增殖活性、迁移和侵袭能力的影响。　　9.应用 MTS方法、Transwell迁移和侵袭实验检测 SNORA42与DHX9两者联合作用对食管癌细胞增殖活性、迁移和侵袭能力的影响。　　10.应用Western blot方法检测同时敲低DHX9和过表达SNORA42后DHX9相关基因表达水平的变化。　　11.采用全基因组测序方法检测敲低SNORA42后食管癌细胞mRNA的变化。　　结果：　　1.MTS法检测结果显示，敲低SNORA42基因表达能够抑制食管癌细胞KYSE30、KYSE170和TE1的增殖能力（P<0.05），而过表达SNORA42对KYSE30、KYSE170和TE1细胞的增殖能力具有促进作用（P<0.05）。　　2.Transwell小室实验结果显示，敲低SNORA42能够抑制食管癌细胞KYSE30、KYSE170和 TE1细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05），过表达SNORA42能够促进 KYSE30、KYSE170和 TE1细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05）。　　3.Western blot实验结果显示，过表达 SNORA42对 KYSE30和KYSE170细胞周期相关蛋白表达水平无影响，但能够促进食管癌细胞KYSE30和KYSE170细胞转移相关蛋白表达。　　4.ELISA实验结果显示，敲低SNORA42能够抑制食管癌细胞KYSE30和KYSE170细胞转移相关蛋白表达（P<0.05），过表达SNORA42能够促进KYSE30和KYSE170细胞转移相关蛋白表达（P<0.05）。　　5.RNA Pulldown实验联合质谱分析结果显示，根据评分筛选出有意义的蛋白：DHX9、SND1，并用western blot实验方法对RNA Pulldown结果进行验证。　　6.RT-qPCR法分析结果显示，与正常食管上皮组织相比，食管癌组织中DHX9 mRNA表达上调，且与SNORA42表达呈正相关。　　7.Western blot实验结果显示，敲低 SNORA42基因表达能够抑制KYSE30和Eca109细胞中DHX9相关蛋白表达，而过表达SNORA42能促进DHX9相关蛋白表达。　　8.MTS法检测结果显示，敲低DHX9基因表达能够抑制食管癌细胞KYSE30和Eca109细胞的增殖活性（P<0.05）。敲低SNORA42基因表达同时敲低 DHX9对食管癌细胞增殖抑制作用进一步加强。同时过表达SNORA42和敲低DHX9可部分恢复过表达SNORA42对细胞KYSE30和Eca109增殖的促进作用（P<0.05）。　　9.Transwell小室实验结果显示，敲低 DHX9基因表达能够抑制KYSE30和Eca109细胞的迁移和侵袭能力（P<0.05）。敲低SNORA42同时敲低DHX9对细胞KYSE30和Eca109细胞的迁移和侵袭抑制作用进一步加强（P<0.05）。同时，过表达SNORA42和敲低DHX9基因表达后，可部分恢复过表达SNORA42对KYSE30和Eca109细胞迁移和侵袭的促进作用（P<0.05）。　　10.Western blot实验结果显示，与过表达SNORA42相比，同时敲低DHX9和过表达SNORA42能够恢复DHX9相关功能性蛋白的表达。　　第三部分：敲低SNORA42基因表达对裸鼠体内食管癌细胞成瘤能力作用的研究　　目的：研究SNORA42对食管癌细胞在裸鼠体内增殖能力的影响。并探讨SNORA42在食管癌细胞中发挥作用的可能机制。　　方法：　　1.对裸鼠移植瘤检测敲低 SNORA42基因表达对裸鼠体内食管癌移植瘤生长的影响。　　2.应用免疫组织化学法检测裸鼠移植瘤组织中 DHX9、MMP2、MMP9表达水平。　　结果：　　1.裸鼠移植瘤实验结果显示，与对照组相比，敲低SNORA42基因表达后裸鼠体内移植瘤体积和重量明显减小。　　2.免疫组织化学法分析结果显示，与对照组相比，敲低SNORA42基因表达组裸鼠移植瘤中DHX9、MMP2和MMP9表达水平均降低。　　结论：SNORA42和 DHX9在食管癌患者肿瘤组织中高表达，且SNORA42与DHX9的表达呈正相关。SNORA42在体内、外均能够促进食管癌细胞的增殖活性，可能与 SNORA42通过与 DHX9相互作用促进BCL-2和抑制 Bax表达有关；在体外还能够促进食管癌细胞的迁移和侵袭能力，其部分机制为SNORA42与DHX9相互作用通过NF-κB信号通路促进 MMP2、MMP9的表达，从而促进食管癌细胞的转移。此外， SNORA42在体内可以促进食管癌细胞增殖。