【摘 要】
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目的:探讨Nur77/NR4A1调控肺巨噬细胞极化在脂多糖（LPS）所致ARDS小鼠肺损伤中的作用。方法:（1）将144只SPF级C57BL/6野生型小鼠（雌雄不限）随机分组:盐水组（对照组）、LPS干预组（LPS组）、LPS+激动剂组（LPS+Csn B组）、LPS+盐水组（LPS+NS组）,设4h、12h、24h三个时间点,每组每个时间点12只小鼠。（2）采用气管插管法气道内滴注LPS（5mg
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（编号:81860021）； 广西自然科学基金（2021GXNSFAA32500）；
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目的:探讨Nur77/NR4A1调控肺巨噬细胞极化在脂多糖（LPS）所致ARDS小鼠肺损伤中的作用。方法:（1）将144只SPF级C57BL/6野生型小鼠（雌雄不限）随机分组:盐水组（对照组）、LPS干预组（LPS组）、LPS+激动剂组（LPS+Csn B组）、LPS+盐水组（LPS+NS组）,设4h、12h、24h三个时间点,每组每个时间点12只小鼠。（2）采用气管插管法气道内滴注LPS（5mg/kg）建立小鼠ARDS模型,分别在造模后4h、12h、24h处死小鼠,收集肺组织、支气管肺泡灌洗液（BALF）用于后续实验。（3）使用肺组织切片苏木精-伊红（HE）染色、肺组织湿干比重（W/D）、BALF总蛋白浓度、酶联免疫吸附试验（ELISA）进行肺组织损伤评估。（4）使用免疫组织化学法（IHC）、免疫荧光法（IF）、western blot检测M1/M2型肺巨噬细胞表达水平,以观察Nur77/NR4A1及外源性Nur77/NR4A1激动剂对LPS致ARDS小鼠肺巨噬细胞极化及肺组织损伤的影响。结果:（1）建立小鼠ARDS模型4h、12h、24h后,与对照组相比,LPS组、LPS+NS组的肺损伤明显加重,且呈时间依赖性,肺组织W/D、BALF总蛋白浓度明显增加,肺组织促炎因子TNF-α增多,Csn B干预后肺组织损伤程度明显减轻,相应时间点的肺组织W/D、BALF总蛋白浓度均有所降低,促炎因子TNF-α减少,提示小鼠ARDS模型建立成功,可用于后续实验。（2）建立小鼠ARDS模型4h、12h、24h后,与对照组相比,LPS组、LPS+NS组的i NOS、F4/80免疫荧光共定位表达增加,且呈时间依赖性,Csn B干预后相应时间点的i NOS、F4/80免疫荧光共定位表达明显减少。在滴注LPS 4h后,与对照组相比,LPS组、LPS+Csn B组、LPS+NS组的Arg-1、F4/80免疫荧光共定位表达稍有增加,但观察组间无明显差异;在滴注LPS 12小时后,与对照组相比,LPS组、LPS+NS组的Arg-1、F4/80免疫荧光共定位表达较4h肺组织增加,而LPS+Csn B组Arg-1、F4/80免疫荧光共定位表达较LPS组、LPS+NS组明显增加,在滴注LPS 24小时后,与对照组相比,LPS组、LPS+Csn B组、LPS+NS组的Arg-1、F4/80免疫荧光共表达均有明显增加。（3）建立小鼠ARDS模型4h、12h、24h后,与对照组相比,小鼠肺组织的IL-1β的表达明显增加,且呈时间依赖性,Csn B干预后相应时间点小鼠肺组织IL-1β的表达明显减少。在LPS滴注4h后,各组小鼠肺组织Arg-1无明显表达,在LPS滴注12h后小鼠肺组织Arg-1呈现表达峰值,其余对照组、LPS组、LPS+NS组无明显表达;在LPS滴注24小时后,与对照组相比,LPS组、LPS+Csn B组、LPS+NS组均呈现高表达。结论:Nur77/NR4A1可通过其介导的抗炎效应对LPS所致小鼠ARDS发挥保护性作用,并可调节肺巨噬细胞在炎症早期极化为M2型巨噬细胞,逆转肺部炎症微环境以发挥保护作用。
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