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本试验用传染性支气管炎病毒(IBV)M41毒株接种10～11日龄的SPF鸡胚,在37℃培养36小时后冷冻,收获的尿囊液先经1,000×g离心30min,弃去沉淀,将含有IBV的上清39,000×g超速离心50min或者PEG8000浓缩后,加HEPES缓冲液使IBV尿囊液的最终体积为原体积的1/100,然后加入胰酶、Ⅰ型卵磷脂酶C(PLC1)、神经氨酸酶处理IBV,胰酶、Ⅰ型卵磷脂酶C(PLC1)、神经氨酸酶的终浓度分别为1unit/ml、2.5units/ml、2.5units/ml,IBV悬液和酶充分混合后,置37℃水浴3个小时,期间不断振荡。制备好的IBV HI抗原用于IBV HA试验,置4℃保存。制备的IBV HI抗原在HA试验中能够凝集鸡红细胞,由胰酶处理IBV制备的抗原在IBV HI试验中不具有特异性,而由PLC1、神经氨酸酶制备的抗原在IBV HI试验中表现出很强的特异性。制备的抗原与进口抗原相比较,IBV HA试验达到很高的效价。本试验对影响IBV HI试验的各种因素做了比较研究,选择1%的鸡红细胞,pH6.5 0.01M HEPES缓冲液为稀释液,抗原抗体在室温作用30min,加红细胞后4℃50min判定结果等条件,建立了监测IBV HI抗体的HI试验。该试验具有很强的特异性和重复性。用建立的IBV HI试验对25份非免疫鸡血清检测,再通过攻毒试验,确定了免疫临界线为6log2。HI试验与检测IBV M41抗体的ELISA试剂盒检测结果比较,HI滴度大于6log2时,ELISA S/P值大于0.2;HI滴度小于6log2时,ELISA S/P值小于0.2,HI试验与ELISA有很大的相关性,并具有很强的特异性、重复性和灵敏性。随机选择92份未知血清,分别用HI试验方法和ELISA方法对其进行检测,两种试验检测结果的符合率为92.4%。研究表明,用自制的IBV HI抗原建立的HI试验简便、快速、准确,可应用到IB的诊断、免疫效果监测和流行病学调查研究。