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牛乳铁蛋白素(Bovine Lactoferricin, LfcinB)是牛乳中乳铁蛋白水解产生的一种活性多肽,对多种肿瘤细胞具有细胞毒作用,而不会对正常细胞产生危害。本课题用不同浓度LfcinB对白血病细胞Jurkat作用,分析其对Jurkat细胞增殖和分化的影响,观察miRNA19b、miRNA223表达水平的变化,探究LfcinB对Jurkat细胞的诱导分化、抑制增殖作用,为将LfcinB开发成一种生物型抗肿瘤新药提供理论和实验依据。方法：将LfcinB用RMPI-1640培养基配制成4个浓度,分别为100、200、300、400μg/mL。用上述浓度的LfcinB处理Jurkat细胞,以未加LfcinB刺激的对数生长期Jurkat细胞为空白对照组,阳性对照组培养液中仅加100nmol/mL的雷帕霉素(RAPA)。采用MTT法检测100～400μg/mL四种不同浓度LfcinB作用Jurkat细胞24、48、72h后细胞增殖抑制率；采用流式细胞术检测LfcinB处理Jurkat细胞24、48h后的细胞周期分布变化、细胞表面分化抗原CD11b表达水平变化；利用荧光倒置显微镜观察0～400μg/mL LfcinB作用Jurkat细胞24h后细胞形态变化；采用NBT还原法检测LfcinB与Jurkat细胞共培养24h、48h、72h后对细胞分化水平的影响；采用RT-PCR法检测LfcinB处理Jurkat细胞36h后对细胞miRNA19b和miRNA223表达水平的影响。研究结果如下：(1)MTT结果显示LfcinB能以剂量依赖性和时间依赖性抑制Jurkat细胞增殖,加药组的抑制率与对照组比较,有显著性差异(P<0.01)。荧光倒置显微镜观察结果显示,空白组细胞形态完整,细胞核着色均匀、荧光呈弥散状,而实验组细胞染色质凝聚,细胞核裂解,有凋亡小体出现细胞凋亡现象。研究结果表明100～400μg/mL的LfcinB可显著抑制Jurkat细胞生长并诱导细胞凋亡,其增殖抑制率和诱导凋亡效应随着LfcinB浓度增加而逐渐提高,300μg/mL为LfcinB抑制Jurkat细胞增殖的最佳作用浓度,诱导细胞凋亡可能是LfcinB抑制Jurkat细胞增殖的作用途径之一。(2)流式细胞仪检测结果显示,LfcinB能诱导Jurkat细胞周期循环停滞于Go/G1期,具有剂量和时间依赖性,加药组与对照组比较,有显著性差异(P<0.01)。表明LfcinB可能通过干扰细胞周期程,使DNA合成受阻,促使细胞不能进入分裂期来抑制肿瘤细胞增殖。(4)NBT还原实验结果显示,LfcinB能显著提高Jurkat细胞的OD值,流式细胞仪检测结果显示,LfcinB能提高细胞表面分化抗原CDllb的表达水平,具有剂量和时间依赖性,加药组与对照组比较,有显著性差异(P<0.01)。以上结果说明LfcinB能诱导Jurkat细胞分化,并具有剂量和时间依赖性。推测LfcinB可能通过诱导Jurkat细胞分化起到抑制血癌细胞增殖的抗肿瘤效应。(5)RT-PCR结果显示,miRNA19b表达水平下降,miRNA223表达水平上升,具有剂量依赖性,加药组与对照组比较,有显著性差异(P<0.05)。表明LfcinB可能通过调控miR-223表达上调来诱导Jurkat细胞分化而产生增殖抑制效应,可能通过调控miRNA19b表达下调来抑制Jurkat细胞增殖。(5)LfcinB对Jurkat细胞的抑制增殖、诱导分化作用是并存的,LfcinB可能通过促进细胞分化、抑制细胞增殖的协同作用达到抗血癌的目的。经过上述分析,得出如下结论：(1)100～400μg/mL的LfcinB可显著抑制Jurkat细胞生长并诱导细胞凋亡,其增殖抑制率和诱导凋亡效应随着LfcinB浓度增加而逐渐提高,300μg/mL为LfcinB抑制Jurkat细胞增殖的最佳作用浓度,诱导细胞凋亡可能是LfcinB抑制Jurkat细胞增殖的作用途径之一。(2)100～400μg/mL的LfcinB可将Jurkat细胞周期阻滞子G0/G1期,表明LfcinB可能通过干扰细胞周期程,使DNA合成受阻,促使细胞不能进入分裂期来抑制肿瘤细胞增殖。(3)100～400μg/mL LfcinB能显著提高Jurkat细胞OD值及细胞表面分化抗原CD11b的表达水平,表明LfcinB可诱导血癌细胞分化,推测LfcinB可能通过诱导Jurkat细胞分化起到抑制血癌细胞增殖的抗肿瘤效应。(4)100～400μg/mL LfcinB能显著提高miRNA223表达水平,下调niRNA19b表达水平,表明LfcinB可能通过调控miR-223表达上调来诱导Jurkat细胞分化而产生增殖抑制效应,可能通过调控miRNA19b表达下调来抑制Jurkat细胞增殖。(5)LfcinB对Jurkat细胞的抑制增殖、诱导分化作用是并存的,LfcinB可能通过促进细胞分化、抑制细胞增殖的协同作用达到抗血癌的目的。