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目的:肿瘤特异性主动免疫治疗是指采用各种肿瘤疫苗(简称瘤苗,tumor vaccine)以诱导机体的抗肿瘤免疫功能,是预防肿瘤复发、转移的重要途径,但在治疗肿瘤时往往由于肿瘤负荷和带瘤宿主免疫倾斜等原因而治疗效果欠佳,需要一种免疫调节物质与其联合应用以达到满意的治疗效果。CpG基序(CpG motifs),是指一类以非甲基化的胞嘧啶和鸟嘌呤核苷酸(CpG)为核心的寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotieds,ODN),研究证明,CpG ODN能非特异性激活机体的免疫功能,尤其是细胞免疫功能,可作为免疫佐剂使用。我室对瘤苗和CpG motifs都分别做过抗肿瘤治疗的实验研究,证明了TVPBH就有较强抗肿瘤作用,可用于治疗,另外证实CpG ODN具有很强的抑瘤效果,能增强荷瘤小鼠的细胞免疫活性,但对肿瘤细胞无直接的细胞毒作用。在此基础上,本次实验进行了CpG ODN联合热固化瘤苗的抗肿瘤免疫实验研究,进一步揭示了CpG ODN对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用及荷瘤小鼠免疫功能的变化特点,并为CpG ODN作为治疗性佐剂的临床应用提供一定的依据。方法:32只BALb/c小鼠随机分为4组,每组8只:生理盐水对照组(N),热固化瘤苗治疗组(T),CpG治疗组(CpG),CpG+热固化瘤苗联合应用治疗组(CpG+T)。4组实验小鼠于荷瘤第2天,分别腹腔注射:NS,热固化瘤苗(2×107/0.1ml/只),CpG(10μg/0.1ml/只),<WP=5>瘤苗+CpG( {瘤苗(2×107)+CpG(10μg)}/0.1ml/只),并分别隔日注射一次,共注射5次。15d后处死小鼠,剥取肿瘤称量平均瘤重,计算抑瘤率、制备荷瘤小鼠NK、MФ、CTL细胞并测定其体外杀伤活性、检测荷瘤小鼠血清IL-12、IL-10含量。 结果: 1.各组实验小鼠抑瘤率:瘤苗、CpG ODN或瘤苗和CpG ODN联合使用均能抑制肿瘤生长,各组的抑瘤率分别为48.92%、75.0%、86.67%,与生理盐水(N)组相比,其抑瘤效果具有显著性差异(p<0.05); 瘤苗+CpG联合应用组与瘤苗组或CpG组相比较,抑瘤效果也具有显著性差异(p<0.05)。2.各组实验小鼠NK细胞杀伤活:与生理盐水组相比,单独使用瘤苗时,不能增强荷瘤小鼠的NK细胞杀伤活性(p>0.05),单独使用CpG时可以增强荷瘤小鼠的NK细胞杀伤活性(p<0.05);联合使用瘤苗+CpG时,与生理盐水组相比可以增强荷瘤小鼠的NK细胞杀伤活性(p<0.05),与单独使用瘤苗组相比较,效果具有显著性差异(p<0.05),但与单独使用CpG组相比较,效果没有显著性差异(p>0.05)。3.各组实验小鼠CTL细胞杀伤活性:与生理盐水组相比,单独使用瘤苗时,能增强荷瘤小鼠的CTL细胞杀伤活性(p<0.05),单独使用CpG时,可以增强荷瘤小鼠的CTL细胞杀伤活性(p<0.05);联合使用瘤苗+CpG时,与生理盐水组相比可以增强荷瘤小鼠的CTL细胞杀伤活性(p<0.05),与单独使用瘤苗组相比较,效果具有显著性差异(p<0.05),与单独使用CpG组相比较,效果也具有显著性差异(p<0.05)。4.各组实验小鼠MФ细胞杀伤活性:与生理盐水组相比,单独使用瘤苗时,能增强荷瘤小鼠的MФ细胞杀伤活性(p<0.05),单独使用CpG时,可以增强荷瘤小鼠的MФ细胞杀伤活性(p<0.05);联合使用瘤苗+CpG时,与单独使用瘤苗组相比较,效果具有显著性差异(p<0.05),但与单独使用CpG组相比较,效果没有显著性差异(p>0.05)。5.各组实验小鼠血清中IL-12水平:与生理盐水组相比较,单独使用瘤苗时,不能增高小鼠血清中IL-12水平(p>0.05),单独使用<WP=6>CpG时,可以增高小鼠血清中IL-12水平(p<0.05);联合使用瘤苗+CpG与单独使用CpG或瘤苗相比较,血清中IL-12水平有显著性增高(p<0.05)。6.各组实验小鼠血清中IL-10水平:结果表明,与生理盐水组比较,单独使用瘤苗或CpG都可以显著降低小鼠血清中IL-10水平(p<0.05);联合使用CpG+瘤苗与单独使用CpG或瘤苗相比较,小鼠血清中的IL-10水平有显著降低(p<0.05)。结果显示:联合使用CpG+瘤苗可增强荷瘤小鼠的免疫功能,尤其是细胞免疫功能,其可能机制是调节多种细胞因子分泌,形成较强的免疫活性微环境。在本次实验中,我们发现联合应用瘤苗+CpG ODN时,可以增强荷瘤小鼠NK、MФ、CTL细胞的体外杀伤活性,还可以提高荷瘤小鼠血清IL-12水平同时降低荷瘤小鼠血清IL-10水平。