【摘 要】
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杜仲Eucommia ulmoides Oliv是我国珍贵树种,有“植物黄金”之称,其皮、叶、雄花和种子均可药用或者食用,各类相关的中成药、保健品和饮品广泛存在于市场。杜仲的干燥树皮是名贵中药杜仲,干燥叶是另一味中药杜仲叶,两者均被收载于2020版《中国药典》,具有补肝肾、强筋骨的功效。杜仲籽油和杜仲雄花分别于2006年和2014年被批准为新资源食品和新食品原料,且现代药理学研究表明,杜仲种子和雄
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杜仲Eucommia ulmoides Oliv是我国珍贵树种,有“植物黄金”之称,其皮、叶、雄花和种子均可药用或者食用,各类相关的中成药、保健品和饮品广泛存在于市场。杜仲的干燥树皮是名贵中药杜仲,干燥叶是另一味中药杜仲叶,两者均被收载于2020版《中国药典》,具有补肝肾、强筋骨的功效。杜仲籽油和杜仲雄花分别于2006年和2014年被批准为新资源食品和新食品原料,且现代药理学研究表明,杜仲种子和雄花具有抗骨质疏松、镇静催眠、抗炎镇痛等作用。然而,杜仲皮、叶、雄花、种子四个部位的化学物质基础研究比较薄弱,缺乏系统的化学表征和比较研究,严重阻碍了杜仲及其相关中成药或产品的质量控制的水平。针对上述问题,本论文基于液相质谱联用技术对杜仲皮、叶、雄花、种子展开系统的定性定量研究:1.基于液相色谱和高分辨质谱联用技术,建立UPLC/QTOF-MS Fast DDA的分析方法,对杜仲皮、叶、雄花、种子的化学成分进行系统表征。从杜仲四个部位共表征222个化合物,其中包括木脂素类42个、环烯醚萜类18个、黄酮类117个、苯丙素类25个、有机酸11个、其它类化合物9个。杜仲不同部位所含化合物的主要类型不同,杜仲皮中主要含有木脂素类化合物,叶和雄花中主要含有黄酮类化合物,种子中主要含有环烯醚萜类化合物。2.采用植物代谢组学的方法,基于UPLC/QTOF-MSE分析平台,采集杜仲皮（10批）、叶（9批）、雄花（10批）、种子（9批）的质谱数据,数据经Progenesis QI软件进行预处理后,导入SIMCA-P软件进行主成分分析（PCA）、偏最小二乘判别分析（PLS-DA）、正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）,设置 VIP＞1,|p|＞0.98,|p（corr）|＞0.3 和Fold change＞4,筛选出25个差异性成分。用UPLC/QDa的选择离子监测模式（SIM）靶向监测8个较为重要的质量标志物,对市售中成药中杜仲投料部位进行鉴别。结果表明,除天麻杜仲丸外,其它11种中成药均与药品说明书规定的投料部位相符。3.采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱（UPLC/QQQ-MS/MS）负离子多反应监测模式（MRM）,建立同时测定松脂醇二葡萄糖苷、松脂醇单葡萄糖苷、丁香树脂醇双葡萄糖苷、丁香树脂素单葡萄糖苷、杜仲树脂酚双葡萄糖苷、京尼平苷、京尼平苷酸、车叶草苷、异槲皮苷、芦丁、紫云英苷、槲皮素、儿茶素、绿原酸、异绿原酸A、咖啡酸、阿魏酸等17个成分的质谱定量方法,并进行方法学验证。结果表明,该方法专属性好,在考察的浓度范围内测定的17个成分的线性关系良好（r＞0.995）,杜仲皮和杜仲叶的重复性RSD（%）分别为0.38～6.43和1.42～8.07,日内精密度RSD（%）分别为1.09～2.59和0.61～3.80,日间精密度RSD（%）分别为2.39～15.83和2.34～14.60,稳定性RSD（%）分别为1.13～4.37和0.93～6.56,回收率分别为90.158%～101.13%和94.878%～111.48%。运用上述方法,对杜仲皮、叶、雄花、种子和26批含杜仲或杜仲叶的中成药中的17种成分进行含量测定。结果表明,测定的5个木脂素类成分在杜仲皮中的含量最高,5个黄酮类成分在杜仲叶和雄花中的含量高于皮和种子。综上,本论文对杜仲皮、叶、雄花、种子的化学成分进行了系统分析和比较研究,阐明了四个部位之间化学成分的差异,为杜仲及其中成药的质量控制和资源合理利用奠定了基础。
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