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根据已发表文献及DNAstar软件分析，选取GA株马立克氏病病毒（MDV）BamHI-I3区糖蛋白B 250-460位氨基酸为目的片段，进行串联表达。根据GenBank发表的序列，Primer5.0软件的辅助下分别设计两对引物Primer（U1）、Primer（U2）和Primer（D1）、Primer（D2），并在上游片段5’端加上ATG GCG、下游片段5’端设计一个长9个氨基酸的linker（GSLAGALGL）和下游片段3’端加上TAA，使上游片段和下游片段串联后形成一个完整的阅读框。用PCR扩增出上游片段gB（U）和下游片段gB（L／D）。将PCR产物分别克隆入pBluescriptSKⅡ+，构建成pSKgB（U）和pSKgB（L／D）。从pSKgB（U）以XbaⅠ+BamHⅠ酶切出gB（U），克隆入pSKgB（L／D），构建成pSKgB（U／L／D）。然后从pSKgB（U／L／D）中以XbaⅠ+PstⅠ酶切出串联片段gB（U／L／D），克隆入pEFgpt12S，构建成pEFMDgB（U／L／D）重组鸡痘病毒转移质粒栽体。 确定转染时亲本毒的用量及筛选重组病毒选择性培养基中霉酚酸的浓度后，用磷酸钙共沉淀法，将鸡痘病毒转移质粒载体pEFMDgB（U／L／D）与鸡痘病毒FPV 282E4株在次代CEF上进行同源重组，将目的基因导入FPV ORF1区。用霉酚酸法连续筛选10代获得重组病毒rFPV-MDgB（U／L／D）。用间接免疫荧光试验（IFA）鉴定，可见阳性重组病毒表达产物产生特异性荧光，表明重组病毒成功表达了串联目的片段且串联表达产物具有免疫原性：对亲本毒和重组毒的TCID50试验测定结果是两者的TCID50值基本一致，表明外源基因插入鸡痘病毒ORF1后不影响病毒的复制和生物学特性。 将筛选到的重组鸡痘病毒rFPV-MDgB（U／L／D）继续在2％MEM中5代，测定重组病毒分别在选择性培养基和普通培养基中的病毒滴度，并与亲本毒的滴度相比较，结果基本一致，说明重组病毒已得到了纯化且比较稳定。用rFPV-MDgB（U／L／D）+CVI988（商品苗）和CVI988（商品苗）分别免疫1日龄SPF鸡，8日龄时用RB1B株超强毒MDV攻毒，隔离饲养9周，在此期间，剖检死亡鸡，检查记录MD的病变情况，并每周每组取2-3只鸡采血制备血清和每只鸡采翅部羽毛6根，饲养9周后全部扑杀存活鸡，统计记录MD的发病情况。疫苗对RB1B株MDV在羽毛囊中复制的影响的AGP测定结果为两试验组疫苗免疫均可抑制RB1B株超强毒MDV羽毛囊排毒；攻毒后血液中MDV抗体水串联表达GA沐MDv gB主要表位荃因重组鸡痘病毒的构建及其免没保护作用平的AGP检测结果是在疫苗免疫后的第三周开始试验鸡体内MOV抗体水平逐步稳定上升;疚苗免疚效果的结果是两种疫苗免疚后均能保护试验鸡抵抗RBIB株超强毒MOv的感染，与攻毒对照组的差异显著，但两试验组的差异不显著.