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研究背景及目的:糖尿病肾病是糖尿病的重要并发症和致死原因,也是造成慢性肾功能衰竭的常见原因。大约有30%胰岛素依赖型(1型)和5-30%非胰岛素依赖型(2型)糖尿病患者发展成为糖尿病肾脏疾病。在糖尿病肾病的初期是以肾小球滤过率的增加或超滤过为特征,之后逐渐发展成为终末期肾功能衰竭。研究表明,由内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthases,eNOS)和神经元型一氧化氮合酶诱导的一氧化氮(nitric oxide,NO)的产生与糖尿病肾脏的超滤过有关。关于eNOS的表达和NO的产生在肾脏的内皮细胞和上皮细胞已有研究,而在肾小球系膜细胞中的研究至今仍未发现。该实验以大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cell,RMC)为模型细胞,研究高糖诱导的eNOS的表达和NO的产生。方法:大鼠肾小球系膜细胞(RMC)常规培养在含5.5mM葡萄糖的RPMI 1640培养液中,用胰蛋白酶-EDTA混合消化酶传代;用[Ca2+]i显示剂Fura-2 AM(1μM)和NO显示剂DAF-2 DA(0.5nM)双标记RMC,[Ca2+]i和NO的变化用QM-6荧光计同步测定;用RT、Real Time-PCR和Western Blot测定eNOS的蛋白和mRNA相对含量;构建质粒pDsRed eNOS,并建立稳定的转染RMC系,应用激光共聚焦观察记录转染的细胞,用分光光度计测定转染细胞的荧光表达。各项参数均以均数±标准差(Mean±S)表示,采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),多重比较采用Dunnett t/Tamhane,s T2方法。显著性水平α=0.05。结果:在肾小球系膜细胞中,高糖明显增加eNOS的表达(p<0.05),并有一定的量效、时效关系,同时可促进NO的产生;放线菌酮可以抑制eNOS的蛋白合成;高糖对eNOS的作用不受其磷酸化的影响;PKC和细胞外信号调节激酶抑制剂对eNOS的蛋白合成没有影响;脱氧葡萄糖可以与葡萄糖竞争而抑制eNOS的表达;高糖对eNOS表达的调节与eNOS mRNA的稳定性没有明显关系;高糖明显增加eNOS启动子的活性(p<0.05)。结论:首次检测出eNOS在RMC中的表达,并观察到高糖可以上调eNOS mRNA和蛋白的表达,同时可以促进NO的产生;第一次构建了一个包含了1.6kb片段的大鼠eNOS启动子的pDsRed eNOS表达载体,并建立了稳定的转染细胞系;从而得出高糖对eNOS表达的调控可能主要是转录水平的调节,特别是eNOS启动子的调节。为eNOS介导的NO的产生和由此导致肾小球的超滤过提供了新的证据。研究背景及目的:血管生成在冠心病发生、发展及治疗中占有重要地位,血管内皮生长因子是血管生成中的关键调节因子;中药也在这一领域占有很大优势。当归、川芎这两味在临床上治疗缺血性疾病有效的药物,目前其在血管生成中有什么作用仍不清楚。方法:SD雄性大鼠33只,随机分为3大组,即正常对照组、预防组(预防模型组、中药预防组)及治疗组(治疗模型组、中药治疗组),中药组又分当归、川芎高(4.5 kg BW-1 day-1)、低(1.5 kg BW-1 day-1)剂量组。中药灌胃14d后处死取材;用免疫印记法(Western Blot)测定心肌组织中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的蛋白相对含量,并用免疫组织化学方法观察VEGF在心肌组织中的蛋白表达强度;用酶消化法体外培养心肌微血管内皮细胞,应用MTT比色法检测内皮细胞的增殖;制作鸡胚尿囊膜模型,观察并记录其总血管数。各项参数均以均数±标准差(Mean±S)表示,采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),多重比较采用Dunnett t/Tamhane,s T2方法。显著性水平α=0.05。结果:中药当归能增加缺血心肌VEGF的表达(p<0.05),也可促进内皮的增殖和微血管再生(p<0.05);川芎在预防组可以提高VEGF的表达,在治疗组抑制其表达,同时可促进内皮细胞增殖和血管新生。结论:中药当归和川芎对血管生成有一定促进作用,其可以通过上调血管生长因子的表达,也可以通过促进内皮的增殖、血管再生等综合因素起作用。中药成分复杂,其具体机制有待进一步研究。