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化疗耐药是现在肿瘤难以克服的重要原因之一。化疗耐药的形成原因包括基因水平和表观遗传学的改变。研究表明，miRNA是肿瘤多药耐药形成的原因之一。我们从miRNA出发，研究肿瘤多药耐药的形成机制。本文以MCF-7/WT和MCF-7/ADM细胞为模型，探讨在MCF-7/ADM细胞中失调的miRNAs。首先，对高通量测序方法得到的MCF-7/WT和MCF-7/ADM两株细胞的miRNA表达谱进行分析，结果显示miR-489是MCF-7/ADM细胞中显著下调的miRNA之一；进一步通过荧光定量PCR和原位杂交的方法确认了miR-489在这两株细胞中的相对表达量。结果显示，miR-489在MCF-7/ADM细胞中的表达与MCF-7/WT细胞相比显著下降。用MTT的方法检测miR-489对MCF-7/ADM细胞药物敏感性的影响。结果显示，在MCF-7/ADM细胞中转染miR-489的模拟物能增加MCF-7/ADM细胞对药物的敏感性。本文进一步对miR-489的作用机制进行研究。用TargetScan软件对miR-489的靶点进行预测，并在HEK293T细胞中用双荧光报告基因方法验证了Smad3是miR-489的作用靶点之一。为了验证miR-489能在MCF-7/ADM细胞中靶向Smad3mRNA。本文首先用western blot的方法证明了Smad3在MCF-7/ADM细胞中显著升高。然后，用免疫荧光染色和western blot的方法验证了MCF-7/ADM细胞中转染miR-489的模拟物能抑制细胞中Smad3的表达。研究表明，Smad3与上皮间充质转化有关。所以本文对MCF-7/WT和MCF-7/ADM细胞是否发生EMT现象进行研究。在分子水平，通过免疫荧光染色的方法，检测MCF-7/WT和MCF-7/ADM细胞中上皮间充质转化标志物E-cadherin和Vimentin表达。结果表明，MCF-7/ADM细胞中E-cadherin表达水平下降，Vimentin表达水平升高。在功能水平，本文对MCF-7/WT和MCF-7/ADM细胞的迁移能力进行研究。Transwell结果显示，MCF-7/ADM细胞较MCF-7WT细胞具有较强的迁移能力。接下来，我们对miR-489是否影响MCF-7/ADM的上皮间充质转化特性进行研究。本文通过反转录PCR，免疫荧光染色和western blot的方法检测miR-489的模拟物对MCF-7/ADM细胞中E-cadherin和Vimentin表达的影响。结果显示， miR-489能使MCF-7/ADM细胞中E-cadherin表达水平升高，降低细胞中Vimentin的表达水平。此外，transwell的结果显示，miR-489能抑制MCF-7/ADM细胞的迁移能力。本文进一步研究在肿瘤移植瘤和临床标本上miRN-489及基因的特性。用免疫组化和原位杂交方法，对乳腺癌移植瘤及化疗和未化疗临床标本的上皮间充质转化和miR-489的表达进行研究。免疫组化的结果表明，MCF-7/ADM的移植瘤和化疗后耐药的临床标本上的E-cadherin的表达偏低，而Vimentin和Smad3的表达较高。原位杂交的结果显示，miR-489在MCF-7/ADM移植瘤和化疗后耐药的临床标本上表达偏低。即表明miR-489及相关基因在组织水平的表达情况与细胞水平相一致。本文首次证明了，在人乳腺癌耐阿霉素细胞株中miR-489靶基因是Smad3，且调节化疗耐药和EMT特性。所以通过增加细胞中miR-489的表达水平或是抑制Smad3的表达为乳腺癌耐药的治疗带来希望。