【摘 要】
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目的：探讨WAVE1抑制后对HL-60细胞自噬及化疗敏感性的影响。方法：首先将携带WAVE1shRNA病毒颗粒转染HL-60细胞,通过流式细胞术、RT-PCR、Western blot方法验证转染效应；Western
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目的：探讨WAVE1抑制后对HL-60细胞自噬及化疗敏感性的影响。方法：首先将携带WAVE1shRNA病毒颗粒转染HL-60细胞,通过流式细胞术、RT-PCR、Western blot方法验证转染效应；Western blot、电镜检测稳定沉默WAVE1后自噬水平；CCK-8检测下调WAVE1基因后对ADM化疗敏感性的影响。结果：1.CCK-8结果示WAVE1shRNA组及Control组在不同MOI值感染细胞对HL-60细胞生长均无明显抑制作用；2. ControlshRNA组和WAVE1shRNA组荧光显微镜下可见较多绿色荧光,未处理组无绿色荧光表达；流式细胞术检测MOI=1OO时,转染效率最高；与未经处理组和Control组相比,转染WAVE1shRNA组的WAVE1mRNA和蛋白水平均降低,证实稳定下调WAVE1的HL-60细胞株构建成功；3.利用CCK-8方法检测出嘌呤霉素筛选浓度为8ug/ml;4.ADM处理细胞48h后,与Control组比较,WAVE1shRNA组LC3-Ⅱ水平明显下降,电镜下观察细胞内自噬泡明显减少,表明下调WAVE1能抑制ADM诱导的自噬。5.细胞经caspas-3抑制剂(Z-DEVE-FMK)预处理后,WAVE1shRNA组细胞存活率较未转染组及Control组显著下降,P<0.05,n=3。结论：下调WAVE1的表达能抑制细胞自噬水平,通过抑制自噬而增强了HL-60对化疗的敏感性。
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