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目的以弓形虫ME-49感染人T白血病细胞株Jurkat T细胞和Molt-4 T细胞为模型,以NF-κB及其相关调控蛋白为研究对象,分析NF-κB信号通路中调控蛋白A20在弓形虫诱导人白血病T细胞株增殖和凋亡中的作用机制以及ABIN1蛋白对Caspase8蛋白的调控作用,为弓形虫感染诱导人白血病T细胞株凋亡的机制提供较为明确的理论依据。方法1.Tunel,流式细胞术检测Jurkat T与Molt-4 T细胞凋亡情况。2.免疫印迹(Western blotting)检测pNF-κB,A20,ABIN1的蛋白表达水平。3.慢病毒shRNA分别敲低Jurkat T与Molt-4 T细胞的A20与ABIN1基因,结合Western blotting技术检测敲低后各蛋白表达情况。4.ABIN1过表达质粒转染入Jurkat T与Molt-4 T细胞,结合Western blotting技术检测过表达后各蛋白表达情况。结果1.在一定数量的弓形虫ME-49速殖子的作用下,Jurkat T与Molt-4 T细胞的增殖效应被抑制,凋亡水平出现明显增加,且随速殖子数量(5×10~5,1×10~6,5×10~6)的增加而出现显著增加。2.在弓形虫ME-49速殖子的作用下,Jurkat T细胞中的pNF-κB及ABIN1蛋白表达水平随速殖子数量(5×10~5,1×10~6,5×10~6)的增加而出现显著下调(P<0.05),A20表达水平随速殖子数量(5×10~5,1×10~6,5×10~6)的增加而显著上调(P<0.05),Molt-4 T细胞中也出现类似的变化。3.用慢病毒shRNA敲低Jurkat T细胞中的A20基因后,A20蛋白表达水平出现显著下调,在数量为5×10~6的弓形虫速殖子的作用下,Jurkat T细胞pNF-κB以及ABIN1蛋白水平出现上调(P<0.05),凋亡起始蛋白Caspase-8水平出现下调(P<0.05),并且细胞凋亡水平出现下降,Molt-4 T细胞中也出现类似的变化。4.用慢病毒shRNA敲低Jurkat T细胞中的ABIN1基因后,ABIN1蛋白表达水平出现显著下调(P<0.05),在数量为5×10~6的弓形虫速殖子的作用下,Jurkat T细胞Caspase-8蛋白水平出现明显上调(P<0.05),并且细胞凋亡水平也出现明显上升,Molt-4 T细胞中也出现类似的变化。5.将ABIN1过表达质粒转染入Jurkat T细胞后,ABIN1蛋白表达水平出现明显上调(P<0.05),在数量为5×10~6的弓形虫速殖子的作用下,Jurkat T细胞Caspase-8蛋白水平出现明显下调(P<0.05),并且细胞凋亡水平也出现明显下降,Molt-4 T细胞中也出现类似的变化。结论1.ME-49型弓形虫感染下调T细胞株pNF-κB的表达水平,抑制T细胞增殖,诱导其出现凋亡。2.ME-49型弓形虫上调A20蛋白水平来抑制NF-κB的活化,并下调ABIN1的表达水平。3.增加ABIN1蛋白可以下调Caspase-8蛋白的表达水平,并抵抗弓形虫诱导的T细胞凋亡。