背景:原发性肝癌约占肝癌中的80%~90%,是位列世界第五、我国第三的恶性肿瘤,且发病率和病死率正在逐年上升。在世界范围内,我国一直是原发性肝癌的高发区,由于初期症状不明显,病情进展快,肿瘤恶性程度高,易复发,导致原发性肝癌患者预后差,其5年生存率很低。早发现、早诊断、早治疗,仍然是改善肿瘤预后的最好办法。随着基因组学和分子生物学技术的迅速发展,肿瘤标志物已经成为早期筛选和诊断肿瘤的又一重要方法。近几年,关于肿瘤标志物的研究,已取得了很大的进展,发现了一批敏感度高、特异性强的肿瘤标志物,如甲胎蛋白(AFP)、人宫颈癌基因(HCCR)、瘦素、γ-谷氨酰转移酶Ⅰ、父系表达基因PEG10等。目前临床上使用的肿瘤标志物特异性和敏感度仍然十分有限,因此,新的原发性肝癌肿瘤标志物的筛选已成为国内外研究的热点。目的:本实验着重探讨SMC4在原发性肝癌组织及其细胞株中的表达情况,并分析其与患者临床参数之间的关系。材料和方法1.临床标本采集2009年9月--2010年1月,在第三军医大学大坪医院野战外科研究所肝胆外科,收集原发性肝癌组织及正常肝脏组织(距离肿瘤>2.5cm)各36例,均有病理结果证实。同时,采集肿瘤患者和本科室健康工作人员的血清(取静脉血5ml),离心后,取上清,与收集到的组织一起储存在-73℃冰箱中保存。本研究中选取的均为原发性肝癌患者,并且在手术之前均未行放疗及化疗等任何治疗。2.细胞来源本实验所采用细胞均购于中科院上海细胞库,共6种细胞株。人肝癌细胞分别为:Bel-7405、smmc-7721、H7402;人肝细胞为:HL-7702、OSG-7701、BH-HC1142。3.运用RT-PCR技术分析SMC4基因在原发性肝癌组织中的表达。4.运用IHC技术分析SMC4蛋白在原发性肝癌组织中的表达。5.运用Western blot技术分析SMC4蛋白在原发性肝癌组织中的表达。6.运用RT-PCR技术分析SMC4基因在人肝癌细胞株中的表达。7.运用Western blot技术分析SMC4蛋白在人肝癌细胞株中的表达。8.运用ELISA技术分析SMC4蛋白在原发性肝癌患者外周血清中的表达。9.采用SPSS 13.0统计学分析软件对数据进行统计分析,实验结果以x±s表示,原发性肝癌患者组和正常对照组之间的差异利用t检验进行分析,原发性肝癌患者血清中SMC4的表达水平与临床参数之间的关系利用X2检验进行分析,均以P<0.05为差异显著性指标。结果1. SMC4基因在原发性肝癌组织中的表达增强。RT-PCR结果显示,SMC4基因在原发性肝癌组织中的表达明显强于正常肝脏组织。2. SMC4蛋白在原发性肝癌组织中的表达增强。IHC结果显示,SMC4蛋白定位于细胞质中,在原发性肝癌组织中有较强的染色反应,其中88.9%(32/36)的肿瘤组织表达阳性,仅11.1%(4/36)的肿瘤组织表达阴性,而在正常肝脏组织中,未见其染色反应,阴性表达100%(36/36)。Western blot结果显示,SMC4蛋白在原发性肝癌组织中的表达明显增强。3. SMC4在人肝癌细胞株中的表达水平高于人肝细胞株中的表达。RT-PCR和Western blot分析结果显示,SMC4在人肝癌细胞株中,无论基因水平还是蛋白水平,SMC4的表达远远高于人肝细胞株中的表达。4. SMC4蛋白在原发性肝癌患者外周血清中的表达明显上调。ELISA结果显示,原发性肝癌患者血清SMC4浓度为255.75±26.59ng/ L,健康人群血清中SMC4浓度为205.89±18.55ng/ L,原发性肝癌患者血清中SMC4浓度为远高于正常健康人群。5.统计学分析结果显示,SMC4的表达与肿瘤直径、细胞分化、TNM分期及血管浸润相关(P<0.05),而与患者的年龄、性别、肿瘤类型、AFP表达无关(P>0.05)。结论SMC4在原发性肝癌患者中表达水平明显增强,与正常肝脏组织中的表达差异显著,有助于原发性肝癌的诊断,有可能成为原发性肝癌的肿瘤标志物,并可作为判断其恶性程度的重要指标。