植物激活蛋白的纯化及其抗病作用机理初探

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从真菌(Alternaria ap.)中提取的植物激活蛋白是一种高效、多功能、广谱性、无污染的能诱导植物对病虫害产生免疫抗性的新型植物诱导物质。本实验对植物激活蛋白处理的接种番茄灰霉病菌的番茄幼苗中三种主要防御酶POD、PPO、CAT活性、POD同工酶的动态变化及植物激活蛋白对番茄叶片中Npr1抗病性通调基因及参与蜡质合成基因Cer1进行了研究。结果如下: 1 植物激活蛋白的纯化及抗病性测定 (1) 将粗蛋白通过分级沉淀,过离子柱和疏水柱进一步纯化得到纯蛋白。 (2) 植物激活蛋白抑菌实验结果表明:植物激活蛋白没有直接杀菌的作用。 (3) 植物激活蛋白诱导番茄抗番茄灰霉病的防治效果达71.30% 2 植物激活蛋白对番茄幼苗主要防御酶酶活性的影响 (1) 1μg·mL-1、2μg·mL-1、4μg·mL-1的植物激活蛋白对抗、感番茄幼苗中POD、PPO、CAT均具有诱导作用。且2μg·mL-1的植物激活蛋白诱导效果较好。 (2) 植物激活蛋白对番茄与番茄灰霉病菌互作中POD、PPO具有相似的诱导效果。经植物激活蛋白处理后,番茄主要防御酶POD、PPO活性均比空白对照高,CAT活性显著下降。表明植物激活蛋白可诱导和增强POD、PPO的表达和过氧化氢含量的提高,从而增强植物的防御反应。 (3) POD同工酶谱带变化:当用2μg·mL-1的植物激活蛋白和0.01%SA处理后,中蔬6号与空白对照相比,b1、b2带加强,0.01%SA处理出现了a1、a2两条新的条带。在与灰霉病互作中,a2、a3、b2条带明显增强,同时也出现了a1新的条带。说明植物激活蛋白可诱导或增强b1、b2、a1、a2、a3带POD同工酶谱带的表达。 3 植物激活蛋白对番茄叶片Npr1,Cer1基因相对转录水平的影响 用RT—PCR和PCR方法对番茄中中Npr1抗病性通调基因及参与蜡质合成基因Cer1基因的cDNA、DNA进行了扩增,对退火温度,模板浓度等条件进行了优化。植物激活蛋白能够诱导其大量表达,处理第二天Npr1的表达量约为对照组的6倍,Cer1基因的表达量约为对照组的2倍。
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