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食线虫真菌中有一类特殊的蘑菇成员,被叫做食线虫担子菌。我们实验室前期研究发现皱环球盖菇等担子菌的附属结构能够高效固定、杀死和侵染线虫。该类菌能否稳定地产生大量刺细胞,能否与线虫发生直接接触,成为其运用于生物防治的关键。
前期我们筛选到能诱导球盖菇1.2052产生刺细胞的线虫和细菌,在本研究中进一步分离纯化其中的诱导物质,分析其诱导机制;同时研究新发现促使真菌产生对线虫有趋化性作用的物质及其作用方式。此外,本研究还针对细菌、真菌、线虫三者之间的土壤行为进行了初步探索。
主要结果为:
1.平板试验结果表明,活体线虫及线虫破碎悬液都可以诱导球盖菇刺细胞的产生,活体线虫的活性更强,平均每个视野下有85.5个刺细胞,线虫破碎悬液平均20.4个刺细胞;细菌代谢产物的活性大于菌体活性,当细菌体和代谢产物共存时活性更强,这说明诱导刺细胞产生的物质主要在代谢产物中,而菌体起辅助作用。
2.悉生培养条件下,细菌、真菌与线虫的关系研究。主要指标为细菌的菌落数、球盖菇的刺细胞数、线虫的数量。研究发现,在土壤条件下,细菌和线虫同样可以诱导球盖菇刺细胞的产生。
3.从线虫提取物中分离得到能诱导刺细胞产生的活性化合物——甘油。发现不同浓度的甘油对刺细胞的诱导能力不同,300ppm时甘油的诱导效果最好,平均每个视野下有20.9个刺细胞。诱导的刺细胞同样可以杀死线虫。
4.从细菌B16中分离得到诱导活性化合物——苯丙氨酸,并测试了其他九种氨基酸(L-组氨酸、L-亮氨酸、L-缬氨酸、L-天冬酰胺、L-赖氨酸、L-苏氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸、L-脯氨酸)的诱导活性。发现不同种类的氨基酸及同种不同浓度的氨基酸对刺细胞的诱导能力不同。有诱导能力的氨基酸及其最好诱导浓度为:苯丙氨酸(400ppm)、缬氨酸(300ppm)、脯氨酸(500ppm)、赖氨酸(1000ppm)、亮氨酸(400ppm),同样诱导出来的刺细胞也可以杀死线虫。
5.发现改变培养条件,即在培养基中添加了氨基酸后,线虫对真菌的趋化性会发生变化,线虫对加入某些氨基酸培养的球盖菇产生了趋化性。所测试的氨基酸中只有添加色氨酸和苯丙氨酸的球盖菇培养物有吸引线虫的活性,在苯丙氨酸和色氨酸作用下,球盖菇1.2052产生了对秀丽隐杆线虫有吸引作用的挥发性物质,经过筛选对比发现苯丙氨酸组新产生了吸引物质1-辛烯-3-醇,另一种吸引物质苯甲醛的含量增高;色氨酸组新产生了吸引物质1-辛烯-3-醇、苯甲醛和吲哚。