猪细胞巨化病毒(PCMV)是第二个被发现的猪疱疹病毒,属于β疱疹病毒亚科,可引起猪包涵体鼻炎病。该病自从于1995年首次在英国发现以来,在猪群中分布相当广泛,日本及欧美的血清抗体阳性率都在90%以上。囊膜蛋白gB做为一种必须蛋白,在所有疱疹病毒感染寄主细胞的粘附,穿入,产生细胞融合及扩散的过程中发挥着不可替代的作用,该蛋白同时具有具有良好的免疫保护性及免疫原性。本实验对PCMV gB基因进行了以下研究：1.猪细胞巨化病毒gB的全克隆及pET30-gB重组表达质粒的构建(1)设计引物、PCR扩增出PCMV gB基因目的片段及原核表达基因片段。(2)利用生物信息学软件对PCMV gB基因进行分析及推导蛋白的功能进行预测,表明PCMV gB基因大小为2580bp,编码860aa,与人疱疹病毒6型或7型的MCP基因亲缘关系较近,肽链N-端的1-23氨基酸为信号肽,并在729-751aa间含有跨膜区,蛋白分子整体亲水性较好,抗原位点分布于gB多肽链的整个序列中。(3) EcoRⅠ和SalⅠ限制内切酶双酶切目的片段和质粒pET30(+),将gB基因目的片段连接pET30(+)上,构建融合表达重组质粒pET30-gB。2.重组质粒pET30-gB在大肠杆菌中的表达及表达产物的分离纯化利用IPTG对重组质粒进行诱导表达时发现,重组质粒在37℃、IPTG浓度为0.6mmol/L下诱导4h后可高效的表达出分子量约为80KD的目的蛋白,此外,本实验采用His柱亲和层析对重组蛋白进行分离纯化。3.PCMV gB重组蛋白的抗原性分析将纯化后的蛋白免疫家兔获得多克隆抗体后,进行琼脂糖扩散实验的最高的阳性稀释滴度为1：16,表明PCMV gB重组蛋白具有良好的免疫原性。用Western-Blot说明重组PCMV gB蛋白具有较好的反应原性。本研究完成了对PCMV gB的基因的全克隆,并对该序列及其推导的蛋白进行了较全面生物信息学分析,实现了PCMV gB基因的融合表达,并制备了该重组蛋白的多克隆抗体,对该重组蛋白的抗原性进行了分析,为进一步制备高特异性和高敏感性的PCMV基因工程抗原试剂盒奠定了基础,也为研究猪细胞巨化病毒亚单位疫苗奠定了基础。