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研究背景 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病率仍在持续增长。尽管临床上对乳腺癌的治疗策略已取得了一定成果，但是乳腺癌的复发和转移仍是难以攻克的难题。肿瘤耐药是引起乳腺癌复发的重要原因，对临床治疗产生药物抵抗的肿瘤细胞在复发后将成为更难治愈的肿瘤。肿瘤干细胞是一群具有自我更新能力和多项分化潜能的肿瘤起始细胞，肿瘤耐药被认为是由对药物有抵抗能力的肿瘤干细胞引起的，肿瘤治疗后的复发也可能是由潜伏在肿瘤组织中，增殖不活跃但具有自我更新和分化能力的肿瘤干细胞介导的。 AURKA激酶是在乳腺癌等多种肿瘤组织中过表达的癌蛋白。AURKA异常激活引起细胞基因组的不稳定和非整倍体的形成，在异常情况下促进细胞绕过DNA损伤检验点和纺锤体检验点而继续错误的细胞分裂，破坏细胞极性，从而促使肿瘤发生。肿瘤细胞中高表达的AURKA促进肿瘤细胞的增殖，侵袭及转移，与不良的肿瘤预后相关。AURKA激酶的小分子抑制剂可抑制细胞周期进程，在体外实验中显示能够抑制和杀伤肿瘤细胞，然而在临床应用中却没有良好的效果。 研究目的 本课题拟探索AURKA激酶在肿瘤细胞中空间特异性的分布对乳腺癌干细胞的影响，通过多种分子生物学手段验证AURKA在乳腺癌细胞中核内分布的现象，并探讨其对肿瘤发生发展的作用。本课题由此为出发点，研究肿瘤细胞中过表达的AURKA非激酶依赖的活性，将AURKA激酶活性和AURKA入核能力同时抑制，为临床治疗提供新的靶向AURKA的肿瘤治疗策略。 实验方法 通过核质分离实验将细胞核蛋白与细胞质蛋白分离，分别检测AURKA的表达，又以免疫荧光及免疫组化实验检测AURKA在细胞核及细胞质中的分布情况。使用流式细胞术检测乳腺癌干细胞的表面标记物和酶活性，以及微球悬浮培养实验，探究AURKA对乳腺癌干细胞的影响。通过基因集合富集分析（GSEA），分析AURKA对肿瘤干细胞相关基因的调控作用。通过体内裸鼠成瘤实验，证明阻止AURKA入核可抑制肿瘤生长，增加肿瘤细胞对AURKA激酶抑制剂的敏感性。 结论 1. AURKA激酶在乳腺癌组织及细胞系中有显著的核内分布，乳腺癌恶性转化促进AURKA激酶进入细胞核。 2.在乳腺癌中高表达的AURKA促进乳腺癌干性，敲降AURKA使乳腺癌干性降低。 3.进入细胞核中的AURKA，而不是分布于细胞质中的AURKA，是调控乳腺癌干细胞的重要因素。 4.阻止AURKA激酶入核可抑制肿瘤的生长，增加乳腺癌细胞对AURKA激酶抑制剂的敏感性。