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[目的] 研究肺癌食管癌缺失基因1(Deleted in lung and esophageal cancer1，DLEC1)启动子甲基化对宫颈癌发病的影响，及DLEC1基因甲基化与高危型人乳头瘤病毒(High risk Human papilloma virus，hrHPV)感染之间的关系，研究去甲基化药物对宫颈癌细胞增殖以及对DLEC1基因启动子区甲基化状态、该基因mRNA表达的影响，初步探讨宫颈癌的发病机制，为宫颈癌早期诊断与治疗提供理论依据。 [方法] 1.收集广东医学院附属医院病理科2010年6月至2014年8月的宫颈活检或手术切除标本60例，已经石蜡包埋。宫颈上皮内瘤变(Cercical intraepithelialneoplasia，CIN)-Ⅲ与宫颈癌设为病例组，共40例，宫颈炎与CIN-Ⅰ及CIN-Ⅱ设为对照组，共20例;培养3种宫颈癌细胞系:HeLa、C33A、Caski。采用甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR，MSP)方法，检测DLEC1基因启动子区的甲基化状态。 2.采用普式引物GP5+/GP6+，经PCR及直接测序检测宫颈石蜡标本中HPV的感染情况。 3.分析宫颈石蜡标本中DLEC1基因甲基化与hrHPV感染之间的相关性。 4.MTT比色法检测不同浓度的去甲基化药物5-氮杂-2-脱氧胞苷（5-Aza-2-deoxycytidine，5-aza-dC）干预后，宫颈癌细胞的增殖情况。 5.应用5-aza-dC诱导HeLa、C33A、Caski3种宫颈癌细胞系去甲基化后，MSP检测甲基化逆转情况，实时定量PCR法检测DLEC1基因mRNA的表达。 [结果] 1.宫颈石蜡标本中DLEC1基因的甲基化状态 病例组中，DLEC1基因甲基化率为54.5％(18/33)，明显高于对照组14.3％(2/14)，差异有统计学意义（P＜0.05）。年龄大于46岁的患者DLEC1基因甲基化率为60.9％(14/23)高于年龄小于46岁的患者(40.0％，4/10)，两者比较差异无统计学意义(P＞0.05)。 2.宫颈石蜡标本中HPV感染情况 (1)宫颈石蜡标本中，HPV阳性检出率为80.0％(48/60)，其中病例组中HPV阳性检出率为90.0％(36/40)，对照组中HPV阳性检出率为60.0％(12/20)，差异有统计学意义(P＜0.05)。 (2)在宫颈石蜡标本中，PCR检测出8种亚型的HPV，以高危型HPV为主，其在病例组和对照组的阳性检出率分别为87.5％(35/40)和50.0％(10/20)，两者比较有显著差异(P＜0.01)。 3.宫颈石蜡标本中DLEC1基因甲基化与hrHPV感染之间的相关性 在病例组中hrHPV阳性患者DLEC1基因的甲基化率为57.1％(16/28)，hrHPV阴性患者DLEC1基因的甲基化率为40％(2/5)，两者比较差异无统计学意义(P＞0.05);在对照组，hrHPV阳性患者DLEC1基因的甲基化率为33.3％(2/6)，hrHPV阴性患者DLEC1的甲基化率为0(0/2)，两者比较差异无统计学意义(P＞0.05)。 4.5-aza-dC处理对宫颈癌细胞增殖的影响 与对照组相比，C33A细胞在10μmol/L5-aza-dC作用48 h后，开始出现明显的生长抑制（P＜0.05）。随药物浓度增加，细胞存活率逐渐降低，20μmol/L药物浓度处理72 h对C33A细胞的抑制作用最强，细胞存活率为78.3％; HeLa细胞在5μmol/L药物浓度作用72 h后，开始出现生长抑制（P＜0.05），在20μmol/L药物浓度作用72 h后，细胞存活率最低(86.1％);Caski细胞在20μmol/L药物浓度作用48 h后开始出现生长抑制（P＜0.05），在20μmol/L药物浓度作用72 h后，细胞存活率最低(87.2％)。 5.5-aza-dC处理对宫颈癌细胞DLEC1基因甲基化状态及该基因mRNA表达的影响 (1)5-aza-dC作用前，宫颈癌细胞C33A、HeLa、Caski中DLEC1基因启动子区呈甲基化状态。 (2)经5-aza-dC处理后，宫颈癌C33A细胞中DLEC1基因启动子区出现非甲基化条带，甲基化条带消失，与对照组相比，DLEC1基因mRNA表达水平上调2.33倍，差异有统计学意义(P＜0.05)，HeLa细胞和Caski细胞中DLEC1基因甲基化状态与mRNA表达量均未见明显改变。 [结论] 1.病例组中DLEC1基因的甲基化率明显高于对照组，提示DLEC1基因甲基化可能与宫颈癌的发展进程相关，可以作为宫颈癌早期诊断的表观遗传学标记。 2.DLEC1基因甲基化与hrHPV感染无关，提示DLEC1基因启动子甲基化在宫颈癌的发病中是不依赖于HPV感染的一个独立事件。 3.去甲基化药物处理后，宫颈癌细胞的存活率明显降低，提示该药物可抑制宫颈癌细胞的增殖活性，可作为研究宫颈癌靶向治疗的药物。 4.去甲基化药物处理后，C33A细胞的甲基化状态出现逆转，表达量明显上调，提示去甲基化药物可以通过逆转DLEC1基因甲基化状态上调该基因mRNA的表达水平。