论文部分内容阅读
目的建立大鼠坐骨神经离断模型,产生瓦勒变性现象;靶向调控TOLL样受体4(TLR4)信号通路,探讨TLR4通路对大鼠坐骨神经损伤早期瓦勒变性和神经再生的影响。方法构建大鼠周围神经离断模型,观察瓦勒变性。将40只Wistar大鼠随机分为2组:假手术组(20只)和模型组(20只)。大鼠坐骨神经离断模型中干预TOLL样受体4(TLR4)信号通路。将60只Wistar大鼠随机分为3组:对照组(G1)(20只),TAK-242组(G2)(20只)和LPS组(G3)(20只)。模型组,对照组,TAK-242组和LPS组横断大鼠右侧坐骨神经后,行神经外膜端端吻合;假手术组显露坐骨神经不横断,逐层缝合切口。TAK-242组术前1 h及术后7 d大鼠每天尾静脉注射0.15 mg/kg TLR4拮抗剂TAK-242,LPS组大鼠在神经断端显微注射LPS(2 g/L)1μL,对照组大鼠注射同等体积生理盐水,模型组不作处理。于术后1.5h、24 h、3 d、4 d和7d取术侧坐骨神经。实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测坐骨神经中β-干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)mRNA、白介素1β(IL-1β)m RNA和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA水平;免疫荧光法分析坐骨神经中CD68+细胞和iba1+细胞的表达;劳克坚牢蓝(LFB)染色观察坐骨神经髓鞘变化;苏木精-伊红(HE)染色观察坐骨神经的病理变化;免疫组化法检测TRIF蛋白和生长相关蛋白43蛋白(GAP-43)的表达;坐骨神经功能指数(SFI)分析大鼠下肢运动功能。结果建立大鼠坐骨神经离断模型:与假手术组相比,(1)qRT-PCR显示,模型组的IL-1β和MCP-1 mRNA表达水平均显著升高(P<0.001,P<0.001);(2)免疫荧光可见,模型组中CD68+细胞表达上调(P<0.01);(4)HE染色可见,模型组轴突完全断裂,大量炎性细胞浸润;(3)LFB染色可见,与假手术组相比,模型组损伤远端发生脱髓鞘(P<0.001);(5)坐骨神经功能指数(SFI)显示,模型组大鼠坐骨神经功能完全丧失。大鼠离断模型中干预TOLL样受体4(TLR4)信号通路:(1)qRT-PCR显示,与对照组相比,TAK-242组在TRIF、IL-1β和MCP-1 mRNA表达水平均显著减低((P<0.001,P<0.001,P<0.001),LPS组IL-1β和MCP-1mRNA的表达明显升高(P<0.01,P<0.01);(2)免疫荧光可见,与对照组相比,iba1+细胞和CD68+细胞表达水平在TAK-242组均下调(P<0.05,P<0.05),在LPS组均上调(P<0.05,P<0.05);(4)HE染色可见,与对照组相比,炎性细胞及再生神经纤维在TAK-242组较少,而在LPS组较多;(3)LFB染色可见,与对照组相比,神经断端髓鞘碎片清除率在TAK-242组降低(P<0.05),而在LPS组升高(P<0.05);(5)免疫组织化学可见,与对照组相比,TAK-242组中TRIF表达下调(P<0.01);GAP-43表达下调(P<0.05);(5)SFI显示,与对照组相比,TAK-242组术后20,30和40 d同期比较明显降低(P<0.05),LPS组术后20 d明显增高(P<0.05)。结论TLR4信号通路可以调控免疫反应影响大鼠周围神经损伤后早期髓鞘碎片清除,提示TLR4信号通路参与瓦勒变性。