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目的了解深圳市2007年流感流行特征,探讨流感病毒血凝素蛋白重链(HA1)区基因特性、抗原变异及其与流感流行的关系,为流感防治提供科学依据。材料与方法收集深圳市2007年流感样病例和流感样病例暴发疫情资料,用EXECL和SAS 8.0统计软件对流感样病例就诊百分比进行时间趋势、年龄分布情况统计分析,并设计流感监测预警线和平均水平线。采集流感样病例鼻咽拭子标本,同时接种狗肾传代细胞和9～11日龄鸡胚的羊膜腔和尿囊腔进行流感病毒分离培养,用红细胞凝集及凝集抑制试验实现病毒滴度及型别鉴定。采用随机整群抽样法于流感流行期前、后采集一般人群血清了解深圳人群的血清抗体水平。对所有分离病毒提取RNA,用RT-PCR扩增HA1区基因片段,产物纯化后测序;用DNASTAR软件、SIMMONIC软件和MEGA3.1软件进行核苷酸—氨基酸序列分析、同源性比较、基因进化树构建等分子变异研究,并与WHO推荐北半球疫苗株和国家代表株进行比较,揭示流感病毒HA1区基因变异、抗原性改变及其与流感流行的关系。结果1.深圳市2007年流感流行特征2007年深圳市流感样病例(influenza-like illness,简称ILI)就诊百分比曲线呈单峰分布,流感活动高峰主要分布在4～7月,ILI就诊百分比于第25周达到峰值11.22%,超过预警线值10.86%,较2005、2006年明显提高,且持续时间长;ILI主要集中在0～14岁年龄组儿童,占流感样病例总数的72.97%;学校流感流行高峰较早出现;深圳流感监测预警线具有一定的季节性和灵敏度,能及时发现异常值。2007年共报告流感样病例暴发疫情50起,经实验室PCR检测,35起流感病毒阳性,其中A型29起,B型6起;时间上主要分布在3～6月,占92.0%,88.0%发生于中小学校。2007年共检测流感样病例鼻咽拭子标本2831份,343份阳性,分离率为12.12%;H1N1亚型、H3N2亚型、B型流感病毒所占构成比分别为3.5%、62.68%和33.82%;其中1～6月份以H3N2亚型为主要流行株,7～12月份则以B(Yamagata)系为主要流行株。月病毒分离率1～6月份逐步升高,6月份最高为28.38%,后按月递减,与ILI就诊百分比时间变化趋势一致。结合往年资料发现主要流行株交替出现。2007年3、9月份共采集一般人群血清1700份,H3N2亚型血清抗体阳性率最高,3、9月份分别为:65.82%和72.94%,经检验具统计学意义(P＜0.05),这与2007年H3N2亚型病毒活动水平较高有关;H1N1亚型、B(Victoria)系、B(Yamagata)系毒株3、9月份抗体阳性率分别为46.98%、43.80%、43.84%、21.90%、41.18%和21.67%;除H3N2亚型外,其它三个型别流感病毒几何平均滴度偏低。2.深圳市2007年流感病毒血凝素蛋白重链区基因变异H3N2亚型流感病毒血凝素重链(HA1)区核苷酸同源性和基因进化树结果均显示:2007年H3N2亚型毒株分为两个分支,1～4月份部分毒株与国家代表株A/JXDH/312/2006(H3N2)在一个分支,该部分毒株占1～4月份H3N2亚型分离株的33.33%;5月份之后的毒株与2008～2009年疫苗株A/Brisbane/10/2007(H3N2)为同一分支,并在流行上占优势,该部分毒株占2007年H3N2亚型分离株的89.30%;2005～2006年毒株与2006～2007年度疫苗株A/Wisconsin/67/2005(H3N2)距离较近;A/Brisbane/10/2007(H3N2)是从A/Wisconsin/67/2005(H3N2)进化而来的抗原变异株。氨基酸位点是随着时间发展逐步变化。与参照株A/Wisconsin/67/2005(H3N2)比较发现,所有毒株发生D122N、1223V氨基酸替换,1～4月份部分毒株在抗原决定簇A区发生R142G和N144D氨基酸变异,该变异没有被保留下来,5月份之后的毒株发生G50E、K140I氨基酸替换;D122N、N144D氨基酸置换分别导致增加和丢失一个糖基化位点。受体结合位点氨基酸较保守。H1N1亚型流感病毒HA1区核苷酸同源性和基因进化树结果一致。HA1区基因进化树结果为2007年、2006年毒株和国家代表株A/GDLH/219/2006(H1N1)在一个分支,2005年毒株分为两个分支,4月份之前分离株与A/NewCaledonia/20/1999(H1N1)为同一分支,5月份之后的分离株与A/SolomonIsland/3/2006(H1N1)为一支。氨基酸序列分析显示,2005年5月以后的大部分毒株出现以下氨基酸变异:T82K、Y94H、R146K、R209K和T267N,2006年5月份之后的毒株在抗原决定簇B区发生了A190T、H193Y和E195D氨基酸变异,同时也发生A区R146K的置换。所有毒株的糖基化和受体结合位点比较保守。2007年B型流感病毒HA1区基因进化树分为B(Victoria)和B(Yamagata)两个谱系,其中B(Victoria)系毒株与深圳2006年分离株、本年度疫苗株B/Malaysia/2506/2006、国家代表株B/Shenzhen/155/2005同在一个分支;B(Yamagata)系毒株与国家代表株B/FJXL/54/2006距离最近,其次为2008～2009年度疫苗株B/Florida/4/2006。氨基酸位点分析显示:B(Victoria)毒株发生S134P氨基酸变异,B(Yamagata)系毒株发生R48K、P108A、L131P和D197N氨基酸替换;197-199糖基化位点变异频率较高,76.66%的B(Yamagata)系毒株发生D197N氨基酸置换导致增加一个糖基化位点。结论深圳市流感流行高峰在夏季;流感监测预警线和平均水平线具有较好的季节性和灵敏度,能及时发现异常值。低年龄组人群较易受流感病毒感染,学校流感监测值得重视。深圳每年主要流感流行株交替出现。2007年深圳市H3N2亚型流感病毒的基因特性和抗原性已发生变化,引起该型病毒较高水平的流行,流感病毒抗原变异和人群免疫水平共同影响着流感的流行;建议将分子生物学研究纳入流感监测,密切关注新型流感病毒株的出现。