荔枝结合态过氧化物酶分离纯化及其性质的初步研究

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:ZXYCHENLI
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
褐变导致荔枝采后品质劣变很快,过氧化物酶(POD)是参与荔枝采后褐变的关键酶之一。前人已研究了采后褐变过程中可溶性过氧化物酶(SPOD)活性的变化。本试验以成熟‘乌叶’荔枝为材料,首次测定了荔枝采后结合态过氧化物酶(BPOD)活性变化;探索了荔枝果皮BPOD的分离纯化体系;应用建立的体系,对荔枝果皮BPOD进行了初步分离纯化;并对分离纯化得到的BPOD第一组分进行酶学性质的初步研究。主要的结果如下:对与荔枝褐变相关的生理指标进行测定,4℃与25℃贮藏期间,随着贮藏时间的延长,果皮的褐变指数上升,但果肉可溶性固形物含量(TSS)几乎没有变化,均为16%左右。4℃贮藏,可溶性POD,结合态POD活性均是先上升后下降,同工酶谱条带强弱变化与活性变化一致,但并未出现新的条带也无原条带的消失。25℃贮藏条件下,伴随果实的褐变进程,结合态POD活性迅速上升;同工酶电泳结果显示,结合态POD部分组分的活性显著增加。通过对荔枝果皮匀浆,弃滤液(可溶态POD粗酶液),反复悬浮滤渣,再加入含甘油,去垢剂Triton X-100的盐溶液从荔枝果皮中提取出BPOD粗酶液,并摸索了其在不同层析介质上的分离特性,由此建立了荔枝BPOD的分离纯化体系:将BPOD粗酶液过Streamline Phenyl柱进行粗分离,再过阳离子交换柱CM-52,疏水作用层析Phenyl Sepharose HP,凝胶过滤层析Superdex 200,得到BPOD的四个组分。对纯化后的第一组分进行酶学性质的初步研究,其最适pH为6.5,最适温度为40℃。在H202存在下,对各种底物表现出的活性强弱为:愈创木酚>4-甲基邻苯二酚>肉桂醇>绿原酸>芥子醇>邻苯二酚>抗坏血酸>没食子酸>表儿茶素>对苯二酚>焦性没食子酸;与间苯二酚、苄醇、松柏醇、4-甲氧基酚均无反应。对H202、愈创木酚、4-甲基邻苯二酚、肉桂醇、芥子醇的米氏常数分别为16.3mM.26.9mM、4.5mM、30.1 mM、23.7 mM。DTT、ASA、L-半甘氨酸、Cu2+抑制其活性,Ca2+不影响其活性,Mn2+激活其活性,0.1mM EDTA对其活性无影响,1mM EDTA抑制其活性,0.01% TritonX-100激活其活性,0.05%TritonX-100轻微抑制其活性。
其他文献
Porous graphene has a high mechanical strength and an atomic-layer thickness that makes it a promising material for material separation and biomolecule sensing.
In this study we investigate the dynamic recovery effects in IRF9520 commercial p-channel power vertical double diffused metal–oxide semiconductor field-effect
1.晒种播种前将种子晾晒2~3天,可使种皮的透气性加强,提高胚的活力,促进酶的活性,加速胚乳养分的转化和利用,提高种子的生活力。还起到杀灭种子表面的病菌作用。 2.选种玉米
Efficient calculation of the electrostatic interactions including repulsive force between charged molecules in a biomolecule system or charged particles in a co
该实验以山东农业大学园艺学院培育的山逐5号黄瓜自根苗和以黑籽南瓜砧木的黄瓜嫁接苗为试材,采用盆栽控水的方法,用称重法严格控制土壤含水量,研究了土壤水分对结果期日光温
大粒香12号10万亩单产超500千克红河州人民政府扶贫办661400毛家声大粒香12号是红河州农科所从省农大引进的品种,经过多年试验成功,1994年在元阳、红河、金平、绿春、屏边、河口县示范推广大粒香12号