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多沙唑嗪作为抗高血压治疗的辅助用药,临床常用其消旋体,其分子结构中含有一个手性碳原子和一对对映体。我们曾报道左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪和消旋多沙唑嗪降低麻醉大鼠血压的强度序列为左旋多沙唑嗪<消旋多沙唑嗪<右旋多沙唑嗪。然而,在清醒大鼠长期给予消旋多沙唑嗪的降压效应中,左旋多沙唑嗪和右旋多沙唑嗪两对映体所发挥的作用尚不清楚。本研究目的是,观察连续12周灌胃给予左旋多沙唑、右旋多沙唑嗪和消旋多沙唑嗪(8mg/kg),清醒大鼠动脉血压的变化;观察左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪和消旋多沙唑嗪连续12周灌胃给药时,大鼠进食量、体重增长、肝脏与肾脏功能的改变;采用高效液相色谱仪及FLD荧光检测器,分析连续12周灌胃给药后,多沙唑嗪及其对映体在最大降压作用时的血药浓度;采用大鼠离体尾动脉实验,比较左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪及消旋多沙唑嗪对血管α1肾上腺素受体的阻断作用。第一部分多沙唑嗪对映体长期灌胃给药对清醒大鼠动脉血压的影响大鼠适应性饲养1周后,随机分为溶媒对照组、左旋多沙唑嗪组、右旋多沙唑嗪组以及消旋多沙唑嗪组,每组10只。左旋多沙唑嗪组、右旋多沙唑嗪组及消旋多沙唑嗪组均灌胃给予相应的药物(8mg/kg),溶媒对照组灌胃给予等容积溶媒。给药容积为10ml/kg,每周给药7天,连续12周。于连续灌胃给药11周后,每天每组随机抽取2只未禁食大鼠测量血压。读取给药前0时、药后2小时、4小时、8小时、12小时的收缩压、舒张压、平均动脉压和心率。1多沙唑嗪对映体连续给药12周对未禁食清醒大鼠收缩压、舒张压和平均动脉压的影响。与给药前相比,溶媒对照组大鼠的收缩压、舒张压和平均动脉压于给溶媒后2、4、8、12小时无显著性改变(P>0.05)。消旋多沙唑嗪组大鼠的收缩压在给药后2小时(123.03±3.63mmHg)、4小时(123.93±6.53mmHg)、8小时(102.15±3.68mmHg)以及12小时(113.86±5.28mmHg)均显著低于药前收缩压(144.57±4.18mmHg,P<0.01)。长期给予消旋多沙唑嗪及其对映体降低未禁食清醒大鼠舒张压与平均动脉压的作用与其降低收缩压的作用相似。与溶媒对照组相比,消旋多沙唑嗪组大鼠的收缩压、舒张压及平均动脉压显著降低(P<0.01)。与消旋多沙唑嗪相似,右旋多沙唑嗪组大鼠的收缩压、舒张压及平均动脉压在末次给药后2小时、4小时、8小时、12小时,均显著低于药前值(P<0.05或P<0.01)。但是,右旋多沙唑嗪组大鼠收缩压、舒张压及平均动脉压的最大降幅(药后8小时)显著小于消旋多沙唑嗪(P<0.05)。末次给药后8小时,左旋多沙唑嗪组大鼠的收缩压(112.67±6.56mmHg)、舒张压(72.34±4.24mmHg)及平均动脉压(85.46±4.96mmHg)与药前值(132.81±4.83mmHg、87.15±3.58mmHg、102.00±3.96mmHg)相比,轻微但显著性降低(P<0.05或P<0.01)。但是,与溶媒对照组相比,左旋多沙唑嗪组大鼠收缩压、舒张压及平均动脉压的最大降幅(8小时)无显著改变(P>0.05)。2多沙唑嗪对映体连续灌胃给药12周对未禁食清醒大鼠心率的影响与给药前相比,末次给药后2、4、8、12小时,溶媒对照组、左旋多沙唑嗪组、右旋多沙唑嗪组及消旋多沙唑嗪组大鼠的心率无显著改变(P>0.05)。但是,与溶媒对照组相比,消旋多沙唑嗪组大鼠的心率,于给药后8小时(336.61±16.57bpm比427.43±34.4bpm)和12小时(332.24±22.68bpm比435.15±25.85bpm),显著加快(P<0.05或P<0.01)。第二部分多沙唑嗪对映体长期灌胃给药对大鼠一般状况的影响大鼠适应性饲养1周后,随机分为溶媒对照组、左旋多沙唑嗪组、右旋多沙唑嗪组以及消旋多沙唑嗪组,每组10只。左旋多沙唑嗪组、右旋多沙唑嗪组及消旋多沙唑嗪组大鼠均灌胃给予相应的药物(8mg/kg),溶媒对照组大鼠灌胃给予等容积溶媒。给药容积为10ml/kg,每周给药7天,连续12周。观察多沙唑嗪对映体长期灌胃给药对清醒大鼠进食量、体重增长及血液生化指标的影响。1多沙唑嗪对映体连续灌胃给药12周对大鼠体重的影响灌胃给予溶媒、左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪以及消旋多沙唑嗪之前(0周),各组大鼠体重无显著性差异(P>0.05)。溶媒对照组大鼠在实验第3周(449.2±12.38g)、6周(489.8±14.55g)、9周(516.2±14.04g)以及12周(539.7±14.69g)时的体重显著高于0周时的体重(359.9±6.98g;P<0.01)。与给药前的大鼠体重相比,左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪以及消旋多沙唑嗪各组大鼠,在灌胃给药后的第3周、6周、9周和12周时的体重均显著增加(P<0.01)。双因素方差分析结果表明,左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪或消旋多沙唑嗪组的大鼠体重(第3周、6周、9周和12周),与同时期溶媒对照组相比,均未见显著差异(P>0.05)。2多沙唑嗪对映体连续灌胃给药12周对大鼠进食量的影响与溶媒对照组大鼠0周时的进食量(25.75±0.25g)相比,给药前(0周)左旋多沙唑嗪(24.77±0.57g)、右旋多沙唑嗪(25.32±0.48g)以及消旋多沙唑嗪(26.50±0.50g)各组大鼠的进食量无显著性差异(P>0.05)。统计分析结果表明,除第10周以外,其他各周(第1周至第12周)左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪或消旋多沙唑嗪组大鼠的进食量,与同时期溶媒对照组相比未见显著差异(P>0.05)。左旋多沙唑嗪组以及右旋多沙唑嗪组大鼠在10周时的进食量与溶媒对照组相比显著增加(P<0.05)。3多沙唑嗪对映体连续灌胃给药12周对大鼠肾功能的影响溶媒对照组大鼠灌胃给予溶媒12周后,大鼠肾功能生化指标中的肌酐(CRTN)、尿酸(UA)、尿素(UREA)水平分别为:33.20±1.15μmol/L、70.80±9.31μmol/L、5.28±0.27mmol/L。与溶媒对照组相比,连续灌胃给予左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪及消旋多沙唑嗪12周后,大鼠肾功能生化指标中的肌酐、尿酸、尿素水平未见显著性改变(P>0.05)。4多沙唑嗪对映体连续给药12周对大鼠肝功能的影响溶媒对照组大鼠灌胃给予溶媒12周后,大鼠肝功能生化指标中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)水平及白蛋白/球蛋白比值(A/G)分别为:36.30±3.56U/L、154.30±19.42U/L、57.31±1.71g/L、28.67±0.77g/L、28.64±1.06g/L以及1.00±0.02。与溶媒对照组相比,连续灌胃给予左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪及消旋多沙唑嗪12周后,大鼠肝功能生化指标中的丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、总蛋白、白蛋白、球蛋白水平以及白蛋白/球蛋白比值均无显著性改变(P>0.05)。5多沙唑嗪对映体连续灌胃给药12周对大鼠血糖及血脂水平的影响溶媒对照组灌胃给予溶媒12周后,大鼠血糖(GLU)、胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)水平分别为:5.85±0.38mmol/L、1.15±0.04mmol/L、0.37±0.05mmol/L、0.33±0.01mmol/L、0.24±0.02mmol/L以及0.17±0.02mmol/L。与溶媒对照组相比,连续灌胃给予左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪及消旋多沙唑嗪12周后,右旋多沙唑嗪组大鼠的HDL-C水平显著升高(P<0.01),左旋多沙唑嗪组大鼠的LDL-C水平显著降低(P<0.01);各给药组的其他各项指标均未见显著性改变(P>0.05)。连续灌胃给予左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪及消旋多沙唑嗪12周后,与溶媒对照组相比,左旋多沙唑嗪组、右旋多沙唑嗪组及消旋多沙唑嗪组大鼠的肌酸激酶水平无显著性改变(P>0.05)。第三部分大鼠口服多沙唑嗪对映体后最大降压作用时的血药浓度分析本研究观察了消旋多沙唑嗪单次灌胃给药后,清醒大鼠降压作用的时效关系;分析了食物对消旋多沙唑嗪单次灌胃给药后血药浓度的影响;以及左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪和消旋多沙唑嗪连续12周灌胃给药时,3个药物末次给药后产生最大降压效果时(药后8小时)血药浓度的差异。1消旋多沙唑嗪单次灌胃给药对清醒大鼠血压及心率的影响在给予溶媒后2小时、4小时、8小时、12小时时,溶媒对照组清醒大鼠的收缩压、舒张压以及平均动脉压,与0小时相比无显著改变(P>0.05)。消旋多沙唑嗪给药组清醒大鼠的收缩压,与0小时相比显著降低(P<0.05),单次给药后4小时清醒大鼠收缩压降至最低值,下降了11.90%;舒张压和平均动脉压无显著改变(P>0.05)。溶媒对照组清醒大鼠的心率,在给予溶媒后2小时、4小时、8小时、12小时时,与0小时相比无显著改变(P>0.05)。单次给予消旋多沙唑嗪后2小时、4小时、8小时、12小时时,清醒大鼠的心率与0小时相比无显著改变(P>0.05);给药前与给药后2小时、4小时、8小时、12小时时,大鼠的心率分别为389.43±23.31、343.02±14.06、359.16±17.18、359.16±17.18和344.99±9.23(bpm)。与溶媒对照组相比,消旋多沙唑嗪给药组清醒大鼠的心率无显著改变(P>0.05)。2食物对消旋多沙唑嗪单次灌胃给药后血药浓度的影响禁食大鼠灌胃给予消旋多沙唑嗪后0.5小时,血药浓度迅速升高至254.61±27.69ng/mL,给药后1小时达峰值306.97±43.47ng/mL,给药后2小时仍维持在较高的浓度(296.10±40.97ng/mL);之后血药浓度明显降低,给药后12小时降至30.22±16.53ng/mL。非禁食组大鼠灌胃给予相同剂量的药物后,0.5至2小时的血药浓度略低于禁食组大鼠,但是未见显著性差异(P>0.05);此外,4至6小时的血药浓度呈一平台(170.75±27.05和169.87±40.29ng/mL)。禁食组与未禁食组大鼠给予消旋多沙唑嗪8小时的血药浓度分别为125.35±72.6ng/mL和125.799±33.7ng/mL。3多沙唑嗪对映体末次给药产生最大降压效应时血药浓度的分析末次灌胃给予左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪以及消旋多沙唑嗪后8小时,各组大鼠的血药浓度分别为18.26±3.55ng/mL、177.11±20.66ng/mL和113.18±13.21ng/mL。灌胃给药后8小时,左旋多沙唑嗪与消旋多沙唑嗪的血药浓度显著低于右旋多沙唑嗪(P<0.05或P<0.01);而且左旋多沙唑嗪血药浓度与右旋多沙唑嗪血药浓度的比值为0.1。将消旋多沙唑嗪灌胃给药大鼠的血浆药物进一步进行手性分离检测后发现,其中左旋多沙唑嗪的浓度为12.01±2.45ng/mL,右旋多沙唑嗪的浓度为96.56±9.94ng/mL,两者的比值为0.12。第四部分多沙唑嗪对映体对大鼠离体尾动脉α1受体的阻断作用我们采用大鼠离体尾动脉标本,探讨左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪以及消旋多沙唑嗪对大鼠离体尾动脉α1受体的阻断作用。1溶媒对NA诱发大鼠尾动脉收缩反应的影响溶媒对照组中,建立5轮NA诱导的血管收缩反应量效曲线。第2轮作为对照,其他3轮在建立NA量效曲线前20min加入溶媒。研究结果表明,第2至第5轮NA量效曲线的Emax值分别为1.75±0.05g、1.76±0.07g、1.80±0.07g和1.93±0.06g;统计学分析结果显示,与对照组相比,后3轮NA量效曲线的Emax值和EC50值无显著改变(P>0.05)。在大鼠尾动脉,溶媒对NA量效曲线中各浓度点的血管收缩反应均无显著影响(P>0.05)。2多沙唑嗪对映体对NA诱发大鼠尾动脉收缩反应的影响NA(0.001-100μmol/L)可诱发大鼠尾动脉产生浓度依赖性收缩反应。在给予阻断剂左旋多沙唑嗪、右旋多沙唑嗪及消旋多沙唑嗪之前,各组间NA量效曲线的Emax值和EC50值无明显差异(P>0.05)。在建立第3、4、5轮NA量效曲线前20min,分别于浴槽中加入右旋多沙唑嗪或消旋多沙唑嗪0.001μmol/L、0.01μmol/L和0.1μmol/L。随着消旋多沙唑嗪浓度增加,NA量效曲线右移,Emax值不变(P>0.05)。Schild plot分析结果表明,消旋多沙唑嗪的作用属非竞争性拮抗,斜率(0.716±0.028)小于1(P<0.05)。右旋多沙唑嗪的作用与消旋多沙唑嗪相似,其斜率(0.647±0.018)亦小于1(P<0.05),属非竞争性拮抗。在建立第3、4、5轮NA量效曲线前20min分别给予左旋多沙唑嗪0.003μmol/L、0.03μmol/L和0.3μmol/L,随着左旋多沙唑嗪浓度增加,NA量效曲线右移,Emax值不变(P>0.05)。Schild plot分析结果表明,左旋多沙唑嗪的作用属非竞争性拮抗,斜率(0.607±0.028)小于1(P<0.05)。左旋多沙唑嗪的pKB值(8.032±0.039)显著小于右旋多沙唑嗪(8.995±0.032)及消旋多沙唑嗪(8.694±0.032)的pKB值(P<0.01),并且消旋多沙唑嗪的pKB值明显小于右旋多沙唑嗪的pKB值(P<0.01)。结论右旋多沙唑嗪阻断α1受体的作用显著强于消旋多沙唑嗪和左旋多沙唑嗪,但是清醒大鼠长期灌服消旋多沙唑嗪的降压作用显著强于右旋多沙唑嗪,而左旋多沙唑嗪长期给药未见明显降压作用。研究结果提示,左旋多沙唑嗪是抗高血压药消旋多沙唑嗪的必要成分,其中右旋多沙唑嗪兼具升高HDL-C的作用,左旋多沙唑嗪兼具降低LDL-C的作用。