【摘 要】
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目的B7-H4是共刺激分子B7家族新成员之一,它通过和T细胞上的未知受体结合,抑制T细胞的免疫应答反应。B7-H4在多数肿瘤细胞上都有表达,敲除B7-H4能促进肿瘤细胞的凋亡,因此认
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目的B7-H4是共刺激分子B7家族新成员之一,它通过和T细胞上的未知受体结合,抑制T细胞的免疫应答反应。B7-H4在多数肿瘤细胞上都有表达,敲除B7-H4能促进肿瘤细胞的凋亡,因此认为该分子在肿瘤的免疫逃逸中占有重要的地位。故本课题拟以B7-H4为靶点,研制肿瘤免疫治疗蛋白疫苗,并进一步研究该蛋白疫苗在肿瘤免疫反应中发挥的作用。方法将人工合成的B7-H4胞外段IgV区的编码基因克隆入原核融合表达载体pQE-30中,在目的基因N端插入T辅助细胞表位肽TT编码序列,获得pQE-30-TT-hB7-H4 IgV质粒,经IPTG诱导表达,Ni-NTA亲和层析纯化蛋白,经Western blot鉴定。用纯化的rhB7-H4IgV蛋白免疫昆明小鼠,经ELISA、流式细胞术测定抗血清的生物学活性,并用融合蛋白免疫SP2/0荷瘤小鼠,观察其对肿瘤细胞生长产生的抑制作用。结果所构建的pQE-30-TT-B7-H4IgV载体能稳定地表达rhB7-H4IgV蛋白;纯化后的蛋白免疫昆明小鼠可获得高滴度抗rhB7-H4抗血清(1:10000);流式细胞术结果显示,抗血清可与SP2/0肿瘤细胞结合;抑瘤实验发现,rhB7-H4IgV蛋白疫苗对荷瘤小鼠的SP2/0肿瘤细胞生长具有一定抑制作用。结论rhB7-H4IgV蛋白不仅可引发小鼠体内免疫应答,而且产生的多克隆抗血清能与表达B7-H4的SP2/0肿瘤细胞结合,rhB7-H4IgV蛋白疫苗在一定程度上能抑制荷瘤小鼠的SP2/0肿瘤细胞的生长。
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