产漆酶白腐菌的筛选及深度处理造纸废水的研究

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制浆造纸工业废水水量大,污染物浓度高,经过传统的一级沉降,二级生化处理后,废水中仍含有大量的难降解的木质素及其衍生物,导致排放出水,污染物浓度较高,色度较深,已无法达到GB3544-2008限定的标准,对环境的危害大。白腐菌是已知的能在纯培养条件下,将木质素彻底降解为CO2和H2O的唯一一类生物。白腐菌对木质素的降解是由其产生的胞外酶,木质素过氧化物酶,锰过氧化物酶及漆酶来实现的,其降解过程是以自由基为基础的链反应过程,具有高度的非特异性和立体选择性。白腐菌种类多,分布广泛,但目前对其的研究仅局限黄孢原毛平革菌等几个菌属。本实验的目的是筛选到在宽泛环境条件具有高效率降解木质素能力的菌株,并应用于造纸废水的深度处理,以降低废水的污染负荷和色度。本实验通过定性筛选的平板变色反应结合定量筛选不同菌株对木质素模型物-木质素磺酸钠的降解率,最后获得一株降解能力强的菌株M6,其在培养的12d对木质素磺酸钠的降解率高达50.7%。对M6的菌丝进行染色观察,发现菌丝透明,无分支,菌丝内有多个细胞核,有节状隔膜,但数量较少,无锁状联合,菌丝间有大量的厚垣孢子出现。菌丝的上述形态,符合白腐菌的形态特征,可初步确认该菌株为白腐菌。对菌株M6的产漆酶培养条件进行研究发现,振荡培养优于静止培养,菌株产漆酶的最佳环境条件为,温度2835℃,恒温振荡器转速为140r·min-1,培养基础初始pH为5,诱导剂CuSO14加入量为0.5mmol·L-,在该条件下,该菌株产漆酶的酶活可达178.6U·L-1。采用悬浮态白腐菌对二沉池出水进行处理结果表明,菌株对废水的脱色率明显优于对CODCr的降解率,最佳处理时间为7d,废水初始pH的最佳范围是4.55.0,CuSO14的最适加入量为50mg·L-,漆酶介体HBT最适的投加量为6mg·L-1,在该条件下,CODCr和色度的去除率分别为45.4%和71.6%。处理废水时需要添加碳源,而不需要额外加入氮源。采用玉米芯作为固定载体进行吸附固定白腐菌,固定方法简单,材料简单易得,处理废水效果相对较好。吸附固定的最佳条件为,固定方式采用直接吸附法,载体的规格为1cm×1cm×1cm,固定时间为4d。应用玉米芯吸附固定白腐菌处理废水结果表明,最佳处理时间为5d,pH范围为4.55.5,恒温振荡器的转速为160r·min-1,菌株的投加量为8个/150ml废水,在该条件下,CODCr和色度的去除率分别为51%和80.1%。白腐菌虽然可以利用玉米芯中的碳水化合物作为碳源进行代谢活动,但相对于添加葡萄糖的废水的处理效果明显较差,需要额外加入碳源,以获得较好的处理效果。固定化白腐菌在木质素的降解、CODCr和色度的去除以及代谢的稳定性上明显优于悬浮体系。木质素的降解和脱色过程基本对应,而与CODCr的去除不一致,在表征木质素的降解效果时,木质素的降解率不能代表CODCr的去除率。
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