ANG4是一种新型的抗菌肽,含有144氨基酸残基,属于核糖核酸酶超家族成员,主要在哺乳动物的肠道组织表达,具有抗菌和促血管生成等功能,机体发生炎症反应时也有大量表达,在机体对病原体的免疫过程和血管生成时的血管结构完善与重塑过程中也发挥着重要的作用。但是关于ANG4的大多研究都是建立在实验小鼠,而ANG4在猪体内的表达特点尚不明确,这也是本项研究的目的所在,了解ANG4蛋白在仔猪肠道的表达特点。本实验取健康的1到5周的新生仔猪肠道不同部位,提取蛋白,通过Western blot来确ANG4基因在仔猪不同发育阶段肠道不同部位的表达情况,以及利用免疫组化技术确定ANG4蛋白在仔猪肠道表达的细胞定位。本课题主要研究内容包括以下几个方面:1、ANG4基因在新生仔猪肠道不同部位不同时期的表达水平为了比较ANG4基因在新生仔猪肠道不同部位不同时期的表达水平,取1到5周健康的新生仔猪的肠道不同部位(十二指肠,空肠,回肠,结肠)组织,加入RIPA强裂解液和蛋白酶抑制剂,用电动匀浆器和细胞超声粉碎仪裂解组织,提取蛋白液。用免疫印迹法(western blot)检测ANG4蛋白在不同肠道部位和不同时期的表达量。结果显示ANG4在仔猪肠道不同部位的变化趋势大致相同,且同一组织内,ANG4随着周龄的增长其表达量也逐渐升高,但在前两周增长的并不明显,从第三周到第五周增长的趋势更为明显。另外在同一时期内,ANG4在回肠与结肠内的表达量较高,其次是空肠,在十二指肠内的表达量最低。2、ANG4蛋白在仔猪肠道表达的细胞定位为了确定ANG4基因在仔猪肠道表达的细胞定位,本实验取三周龄的仔猪肠道不同部位(十二指肠,空肠,回肠,结肠)组织,利用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物(streptavidin peroxidase,SP)法对ANG4蛋白仔猪肠道不同部位进行定位。结果显示ANG4蛋白在小肠不同部位的表达基本都集中于小肠绒毛,而腺窝处也有少量表达,主要的表达细胞为杯状细胞以及潘氏细胞。