论文部分内容阅读
目的检测TGF-β1诱导卵巢癌细胞上皮-间质转化过程中miR-99家族表达水平的变化及其对卵巢癌细胞增殖、迁移侵袭的影响,探讨miR-99家族作为判断卵巢癌恶性程度评价指标及其作为治疗靶点的可能性。方法TGF-β1以浓度梯度及时间梯度分别刺激卵巢癌细胞株A2780及SKOV3,Real-time q RT-PCR检测miR-99a、miR-99b及miR-100表达水平变化,Western-blot检测上皮性标志物E-cadherin及间质性标志物Vimentin表达水平变化,CCK-8法检测细胞增殖能力变化,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力变化,分析miR-99家族表达水平与EMT进程及卵巢癌增殖、迁移侵袭的相关性;miR-99家族各miRNA mimic/inhibitor分别或联合转染卵巢癌细胞株,探索miR-99家族mimic或inhibitor能否抑制TGF-β1对卵巢癌增殖、迁移侵袭的影响。结果TGF-β1刺激卵巢癌细胞株A2780及SKOV3后:⑴细胞增殖能力呈时间/剂量依赖性增强,最小作用浓度2 ng/m L和最小作用时间12 h即与空白对照组差异有统计学意义(P<0.01);⑵与空白对照组相比,miR-99家族各miRNA表达量均明显上升,差异具有统计学意义(P<0.01);⑶上皮性标志物E-cadherin较空白对照组表达下降,间质性标志物Vimentin较空白对照组表达上升;⑷细胞迁移侵袭能力均较空白组增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。MiR-99家族各miRNA mimic/inhibitor分别或联合转染卵巢癌细胞株后:⑴与空白对照或阴性对照组相比,miR-99家族各miRNA inhibitor转染组卵巢癌细胞增殖能力增强,且联合转染组的促增殖能力高于各miRNA inhibitor单独转染组,差异均具有统计学意义(P<0.05);⑵与空白对照或阴性对照组相比,miR-99家族各miRNA mimic转染组卵巢癌细胞增殖能力减弱,且联合转染组的抑制增殖能力高于各miRNA mimic单独转染组,差异均具有统计学意义(P<0.05);⑶与TGF-β1处理组相比,miR-99家族各miRNA mimic分别与TGF-β1共处理卵巢癌细胞时,各miRNA mimic不能有效抵抗TGF-β1的促增殖作用(P>0.05),而miR-99家族mimic联合转染与TGF-β1共处理卵巢癌细胞时,可在一定程度上抵抗TGF-β1的促增值作用,差异具有统计学意义(P<0.05);⑷与空白对照或阴性对照组相比,miR-99家族mimic转染组可增强卵巢癌细胞的迁移能力、inhibitor转染组可抑制卵巢癌细胞的迁移能力,差异具有统计学意义(P<0.05);⑸与TGF-β1处理组相比,miR-99家族inhibitor联合转染组可抵抗TGF-β1的促迁移作用,差异具有统计学意义(P<0.05);⑹与空白对照组或阴性对照组相比,miR-99家族mimic转染组可增强卵巢癌细胞的侵袭能力、inhibitor转染组可抑制卵巢癌细胞的侵袭能力,差异具有统计学意义(P<0.05);⑺与TGF-β1处理组相比,miR-99家族inhibitor联合转染组可部分抵抗TGF-β1的促侵袭作用,但差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论TGF-β1诱导卵巢癌细胞发生上皮-间质转化从而进一步增强其增殖、迁移侵袭过程中miR-99家族表达水平升高,提示miR-99家族表达水平可作为判断卵巢癌恶性程度的潜在指标;使用miR-99家族mimic或inhibitor可抵抗TGF-β1的促增殖及促迁移作用,提示miR-99家族具有作为卵巢癌治疗靶点的可能性。