背景与目的大肠癌包括结肠癌和直肠癌,是常见的消化道恶性肿瘤。近年来,随着人民生活水平的改善和生活习惯的改变,我国大肠癌的发病率与死亡率明显升高。大肠癌治疗目前最有效的手段仍是手术切除,但并非所有的患者都可以手术切除,尤其初治时是分期较晚的患者,因为肿瘤患者病变分期的早晚在很大程度上影响着手术治疗的效果。大肠癌起病隐匿,早期多无症状,一旦出现症状,病情往往已经非常严重,甚至已经发生远处转移,失去手术机会。即使是原发肿瘤已被切除的患者,也有相当多的患者死于局部复发或远处转移。大肠癌的生存期与是否存在淋巴结和远处转移密切相关,然而转移形成的机制尚不十分明确。尽管在近些年大肠癌的综合治疗效果已经取得了很大的改善,但是已有转移的患者的治疗前景仍不容乐观,因此,大肠癌的早期诊断和转移风险的预计对这些患者预后的改善非常关键。但目前的临床诊治手段尚不能满足,因此,寻找可靠的标志大肠癌发生、发展和预后的病理学指标具有十分重要的意义。直肠癌占大肠癌的大部分,本研究重在寻找标记直肠癌早期诊断和预后的病理学指标。随着分子生物学技术的发展,人们认识到许多生物分子与大肠癌的发生发展及预后有关,有些已经被证实对大肠癌的诊断及预后有重要意义,如mcm7、mcm5等。mcm7、mcm5属于微小染色体维持蛋白家族(MCMs),该家族是一组DNA复制准许因子,共有mcm2-mcm7六个成员,在调节DNA复制及延伸中有十分重要的作用,同时与细胞周期调控、细胞异常增殖、肿瘤形成密切相关。在DNA复制起始与延伸过程中,MCM蛋白能确保DNA的复制在每个细胞周期仅发生一次,DNA复制调节紊乱的结果将导致基因组的不稳定和细胞的恶性转化。目前,MCM蛋白是国内外研究的热点。分子生物学研究证实,McM蛋白水平能够敏感而特异地反映细胞的增殖情况,是较传统的增殖分子如PCNA、Ki-67更为可靠的增殖指标,在判断肿瘤的恶性度、增殖程度及评估预后方面具有重要意义。同时,MCM水平的增高不但标志着恶性细胞的增殖,而且也标志着非典型性细胞和潜在恶性细胞的增生。本研究旨在研究mcm7、mcm5及cyclin E在直肠癌发生发展中的变化,从而为寻找有价值的临床病理学指标及开发新的肿瘤治疗靶点提供新思路。材料与方法1.收集郑州大学第一附属医院病理科手术切除的直肠腺癌组织标本104例、直肠腺瘤组织标本28例及正常直肠黏膜组织标本36例。所有患者均为初治,术前未行放、化疗及其他针对肿瘤的靶向治疗。2.免疫组织化学SP法检测mcm7、mcm5及cyclin E蛋白在直肠腺癌、直肠腺瘤及正常直肠粘膜中的表达情况。并分析这三个指标分别与大肠癌临床病理参数之间的关系及三者的相关性,探讨其在直肠癌发生发展中的作用。3.采用SPSS17.0软件对所有实验数据进行统计学分析。同一指标在不同病理指标间的比较采用卡方检验或Fisher s精确概率法,采用Spearman等级相关分析直肠癌组织mcm7、mcm5及cyclin E表达的相互关系。检验水准为a=0.05。结果1. mcm7、mcm5在直肠组织中的表达情况：免疫组化结构显示mcm7、mcm5蛋白的阳性着色均定位于细胞核内。Mcm7蛋白在直肠正常粘膜、腺瘤及直肠癌组织中的阳性表达率分别为27.78%(10/36)、53.57%(15/28)、82.69%(86/104),三组之间差异有统计学意义(P<0.05),两两比较亦均有显著性差异(P<0.05)；Mcm5蛋白在直肠正常粘膜、腺瘤及直肠癌组织中的阳性表达率分别为22.22%(8/36)、42.86%(12/28)和76.92%(80/104)三组之间差异有统计学意义(P<0.05),两两比较亦均有显著性差异(P<0.05)。mcm7、mcm5在直肠癌组织中的表达与患者性别、年龄和肿瘤大小的相关性无统计学意义(P>0.05),而与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期的相关性有统计学意义(P<0.05)。2. cyclin E蛋白在直肠组织中的表达情况：免疫组化结果显示,cyclin E蛋白的阳性着色定位于细胞浆或细胞核中。cyclin E蛋白在直肠正常粘膜、腺瘤和直肠癌组织中的阳性表达率分别为11.11%(4/36)、28.57%(8/28)和67.31%(70/104),三组之间差异具有统计学意义(P<0.05)。Cyclin E蛋白的表达与直肠癌患者的年龄、性别、肿瘤大小及浸润深度的相关性无统计学意义(P>0.05),而与肿瘤的分化程度、淋巴结转移及临床分期的相关性有统计学意义(P<0.05)。3.直肠癌组织中mcm7、mcm5及cyclin E蛋白的表达均呈正相关(r>0,P<0.05)关系。结论1. mcm7、mcm5蛋白在正常直肠粘膜、直肠腺瘤及直肠癌组织中的表达逐渐升高,二者在直肠腺癌中的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期密切相关,提示mcm7、mcm5表达水平的上调是直肠癌发生发展过程中的早期事件,可能促进的直肠癌的发生、浸润和转移。2. cyclin E蛋白在正常直肠粘膜、直肠腺瘤及直肠癌组织中的表达逐渐升高,它在直肠癌中的表达与肿瘤的分化程度、淋巴结转移及临床分期密切相关,提示cyclin E蛋白的异常高表达是直肠癌发生发展过程中的早期事件,可能促进的直肠癌的发生和转移。3. mcm7、mcm5和cyclin E蛋白在直肠腺瘤和直肠癌中的表达均呈正相关,提示三者的高表达可能有协同作用,共同参与了直肠癌的发生、浸润及转移过程。4. mcm7、mcm5和cvclin E蛋白可能是直肠癌诊断及预后的有价值的生物分子。