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电致化学发光(ECL)是由电化学反应产生的化学发光。不需要外加激发光源,而且背景信号低,线性范围宽,不需要昂贵的设备,现已成为一种广泛应用的高灵敏度和高选择性的检测方法。电致化学发光免疫传感器是将电致化学发光技术和免疫技术相结合的产物,结合了两者的优点。而免疫分析信号增强技术一直都是免疫分析领域研究的一个重要方向,而在传感器表面固定抗体与抗原是一个非常重要的步骤,对于提高传感器的灵敏度至关重要。纳米技术与免疫分析的结合为免疫分析的研究与发展提供了新的思路。特别是复合纳米材料由于其独特的性质对发展高灵敏的免疫传感器起到了非常重要的作用。本论文主要从以下几个方面开展研究工作：1.基于Ru-silica@Au复合纳米颗粒标记AFP抗体的夹心法电致化学发光免疫传感器Ru(bpy)32+在电极上的固定方法很多,其中Ru(bpy)32-被二氧化硅包覆而制得的Ru-silica复合纳米材料固定在电极表面,Ru(bpy)32能够较稳定的存在,具有强的电致化学发光信号,大的比表面积,好的生物相容性等优点,是一种良好的电极修饰材料。本研究结合了Ru-silica复合纳米材料和金纳米颗粒良好的电子传导性的优点,制备了Ru-silica@Au复合纳米颗粒,将其用于固定二抗,采用夹心法构建了电致化学发光免疫传感器。首先,在裸玻碳电极上电沉积一层纳米金层,之后通过共价键合作用和静电吸附作用固定甲胎蛋白抗体,然后利用抗体与抗原的特异结合作用,将甲胎蛋白抗原固定在电极上,最后再与Ru-silica@Au标记的二抗反应,免疫传感器被成功制备。该方法利用Ru-silica和三丙胺(TPA)的共反应作用,得到了强的电致化学发光信号,更重要的是放大了免疫反应信号,提高了免疫传感器的灵敏度。在最优的实验条件下,其线性范围为0.05-80 ng/mL,检测下限为0.03 ng/mL。该传感器还有着良好的选择性。2.基于DMBA用于抗体标记的夹心式电致化学发光免疫传感器的研究DMBA是Ru(bpy)32+产生电致化学发光的另一共反应试剂,含有一定量的氨基和羧基,可以用于标记生物分子。本实验将DMBA用于标记二抗构建了一个简单而灵敏的夹心法免疫传感器,DMBA标记二抗被固定在电极表面也减少了试剂的消耗。同时,该方法利用Ru-silica中Ru(bpy)32与DMBA的相互作用,得到了较强的电致化学发光信号。首先,将玻碳电极表面修饰上一层CS-Ru-silica复合物,接着通过共价键合作用将纳米金吸附在修饰的电极表面用于固定甲胎蛋白抗体。AFP反应后再与DMBA标记的二抗反应,制备得到免疫传感器。在最优的实验条件下,该传感器与甲胎蛋白在0.025-80 ng/mL的浓度范围内成良好的线性关系,检测下限为8.3 pg/mL。该传感器还显示了良好的稳定性和选择性。3.基于碲化镉量子点与纳米金的复合物标记的HCG的双抗夹心法电致化学发光免疫传感器的研究半导体纳米晶体(又称量子点)由于其独特的荧光特性和良好的生物相容性而广泛应用生物标记和生物传感器。该研究以人绒毛膜促性腺激素(HCG)作为分析物,研制了一种高灵敏基于CdTe/Au复合纳米材料的夹心法电致化学发光免疫传感器。本实验合成了CdTe/Au复合纳米颗粒,将其用于标记anti-HCG, CdTe/Au复合纳米颗粒不仅为吸附生物分子提供了大的比表面积和良好的生物环境,而且还有优良的电致化学发光和电化学特性,可以作为一种良好的固载基质。采用循环伏安法(CV)和电致化学发光(ECL)对电极的组装过程进行了研究。在最优的实验条件下,测定HCG在0.02-50 mIU/mL范围内呈现良好的线性关系,检测下限为0.0067 mIU/mL。该实验方法传感器制备简单,该传感器显示了较高的灵敏度,较好的选择性,实现了对HCG的分析测定。