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C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)属于急性相蛋白，当机体发生组织损伤或受到感染时其在血浆中的含量会急剧上升，通过激活补体与增强巨噬细胞吞噬作用等方式发挥调理作用，清除入侵机体的病原微生物和机体的损伤、坏死、凋亡的组织细胞。CRP作为体内最重要、最敏感、最系统的炎症标志物，在血浆中的水平随着大量异物入侵、感染、组织损伤、肾脏疾病和心血管疾病的发生而迅速升高，能够为多种疾病的诊断提供可靠的依据。随着时间的推移，CRP的临床诊断越来越受到重视，并且已经实际运用于多种疾病的诊断，治疗以及预后判断当中，因此针对CRP的诊断方法也在不断革新当中。在CRP的检测方法中，绝大多数方法依然依靠特异性抗体作为诊断工具，但是传统的鼠源单克隆抗体生产成本相对较高，耗时时间长，抗体产量低等缺点限制了它的应用，而在禽类中发现的卵黄抗体(IgY)生产成本低廉，能够产生大量高特异性抗体并且制备方法便捷；目前发现骆驼体内存在的单域抗体能够在生物学诊断中发挥良好的作用，衍生为基因工程抗体的热点研究方向。
本研究通过CRP抗原对产蛋鸡进行免疫，收集鸡蛋，提取IgY，进行长时间的效价监测，并通过Dotblot验证，结果显示，抗体效价随着免疫次数的推移不断上升，最高效价可达1：128000，Dotblot结果显示IgY与CRP特异性结合，证明了IgY的高特异性与亲和力。
使用CRP抗原免疫双峰驼，在终免后收集外周血，分离出淋巴细胞并从中提取RNA，逆转录成cDNA，设计相关引物，以cDNA作为模板，使用PCR法扩增编码单域抗体的目的基因片段。通过双酶切将目的基因片段切下，使用T4连接酶将目的基因连接至T7噬菌体载体臂上，通过体外包装获得载有目的片段的噬菌体文库，原始库容为1.08×108cfu，经过扩增后库容达到3.4×1012cfu。随后使用CRP作为筛选源进行四轮亲和性生物淘选，通过抗原量递减的方式筛选，使噬菌体文库得到特异性富集。在第四轮的筛选后通过Phage-ELISA挑选特异性较高的单克隆噬菌斑，成功挑选出10个单克隆噬菌斑。
对10个单克隆噬菌斑中阳性结果最高的4个进行后续表达试验，通过双酶切获取目的片段，连接至pET-28a载体，构建BL21表达菌株，转化涂板进行测序及PCR验证，结果4株表达菌均建立成功。进行表达条件的摸索，最终使用20℃，180rpm，12h的诱导条件，0.8mmol/mLIPTG终浓度成功大量表达单域抗体。使用间接ELISA与Westernblot方法验证抗体活性，展现出高特异性与亲和力。希望特异性的IgY与单域抗体能够在后续试验中建立夹心ELISA检测方法，而且优质的抗体也能够为CRP的其他检测方法提供可靠的抗体来源。
本研究通过CRP抗原对产蛋鸡进行免疫，收集鸡蛋，提取IgY，进行长时间的效价监测，并通过Dotblot验证，结果显示，抗体效价随着免疫次数的推移不断上升，最高效价可达1：128000，Dotblot结果显示IgY与CRP特异性结合，证明了IgY的高特异性与亲和力。
使用CRP抗原免疫双峰驼，在终免后收集外周血，分离出淋巴细胞并从中提取RNA，逆转录成cDNA，设计相关引物，以cDNA作为模板，使用PCR法扩增编码单域抗体的目的基因片段。通过双酶切将目的基因片段切下，使用T4连接酶将目的基因连接至T7噬菌体载体臂上，通过体外包装获得载有目的片段的噬菌体文库，原始库容为1.08×108cfu，经过扩增后库容达到3.4×1012cfu。随后使用CRP作为筛选源进行四轮亲和性生物淘选，通过抗原量递减的方式筛选，使噬菌体文库得到特异性富集。在第四轮的筛选后通过Phage-ELISA挑选特异性较高的单克隆噬菌斑，成功挑选出10个单克隆噬菌斑。
对10个单克隆噬菌斑中阳性结果最高的4个进行后续表达试验，通过双酶切获取目的片段，连接至pET-28a载体，构建BL21表达菌株，转化涂板进行测序及PCR验证，结果4株表达菌均建立成功。进行表达条件的摸索，最终使用20℃，180rpm，12h的诱导条件，0.8mmol/mLIPTG终浓度成功大量表达单域抗体。使用间接ELISA与Westernblot方法验证抗体活性，展现出高特异性与亲和力。希望特异性的IgY与单域抗体能够在后续试验中建立夹心ELISA检测方法，而且优质的抗体也能够为CRP的其他检测方法提供可靠的抗体来源。