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目的:探讨磁共振增强剂超顺磁性纳米铁颗粒(Superparamagnetic Iron Oxide,SPIO)Feridex标记人Flk-1(+)CD31(-)CD34(-)间充质干细胞(human Mesenchymal Stem Cells,hMSCs)对其表型、细胞活性、增殖能力及向神经方向分化能力的影响,为磁共振成像技术追踪磁标记移植细胞提供可靠的理论依据。
方法:使用转染剂介导法标记,以含Feridex 50μg/ml及多聚赖氨酸(Poly-lysine,PLL)1.5μg/ml的培养基与hMSCs共同孵育12-18小时。 Fefidex标记后行普鲁士蓝染色测定标记率及标记效率随细胞数目和时间产生的变化、透射电镜观察细胞内铁颗粒分布。通过台盼蓝染色、生长曲线测定及流式细胞仪检测Feridex对细胞活性、生长能力及细胞表型的影响。采用化学诱导法(10mmol/L β-巯基乙醇)及神经营养因子诱导法(100ng/ml碱性成纤维细胞生长因子)在体外诱导hMSCs向神经方向分化。免疫荧光方法检测诱导后对照组及实验组hMSCs神经元和神经胶质细胞特异标记物NF、MAP-2、GFAP和GalC的表达,通过Image-ProPlus 6.0软件测定荧光OD值,比较两组间差异。
结果:使用含Feridex 50μg/ml及PLL 1.5μg/ml的培养基标记hMSCs,标记效率可达96%。电镜检测显示,实验组细胞胞内可见黑色颗粒,以胞浆为主,细胞超微结构与对照组相比无显著性差异。标记后对照组及实验组细胞活性均超过97%;流式细胞仪检测,对照组及实验组细胞CD44、 CD105、Flk-1均为阳性,CD31、CD34均为阴性。Feridex标记后1周,细胞生长能力及活性与对照组相比无显著性差异。Feridex标记效率随观察时间延长及细胞数目增加而逐步下降。化学诱导法诱导后两组细胞均表达NF,MAP2及GFAP均为阴性;神经营养因子诱导法诱导后两组细胞NF、GFAP、GalC均为阳性。两种方法诱导hMSCs向神经方向分化后,测定NF、MAP2、GFAP、GalC免疫荧光OD值,二组间OD值无显著性差异。
结论:
1、采用Feridex 50μg/ml及PLL 1.5μg/ml可有效标记hMSCs。
2、Feridex标记效率随时间延长及细胞数目增多逐渐下降。
3、Feridex对hMSCs增殖能力、细胞活性、细胞表型及向神经方向分化能力均无显著性影响。Feridex作为磁共振活体示踪剂,是安全、高效的。