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目的1.观察5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)、贝伐单抗(bevacizumab,Bev)单用及两者联合瘤内注射治疗结肠癌的的抗肿瘤疗效。2.观察5-氟尿嘧啶、贝伐单抗单用及两者联合局部给药(瘤内注射)对远处肿瘤的作用。3.观察5-氟尿嘧啶、贝伐单抗单用及两者联合的副作用。方法培养人结肠癌HT-29细胞,建立BALB/c裸鼠人结肠癌HT-29双侧胁腹部皮下移植瘤模型,一侧为瘤内注药侧,另一侧为非注药侧,作为自身对照。根据起始给药时瘤内注药侧移植瘤直径的大小分为5mmm组及10mmm组,每组各16只裸鼠；5mm组、10mmm组又各分为4组：A组(对照组,瘤内注射生理盐水,50ul/次,每4天一次,共3次)、B组(5-氟尿嘧啶组,瘤内注射5-FU,20mg/Kg,溶于0.9%生理盐水,每4天一次,共3次)、C组(贝伐单抗组,瘤内注射Bev,4mg/Kg,溶于0.9%生理盐水,每4天一次,共3次)、D组(5-FU+Bev联合组,瘤内注射5-FU20mg/Kg (30ul)后15分钟,瘤内注射Bev4mg/Kg(20u1),每4天一次,共3次),每组各4只裸鼠,各组瘤内注药体积均为50ul。每2天观察1次,以游标卡尺测量肿瘤大小,并记录肿瘤体积(V=0.5×长×宽2)。观察药物对荷瘤鼠模型移植瘤生长的影响；比较给药后第18天各组肿瘤生长抑制值(Tumor Grouth Inhibition,T/C值)；以瘤内注药侧移植瘤直径达15mmm为观察终点,比较肿瘤生长延缓值(Tumor Grouth Delay,T-C值)、肿瘤细胞对数杀灭值(Log cell kill,LCK);以及比较各组双侧移植瘤体积及湿重。同时观察各组裸鼠肝脏、脾脏、肺脏、淋巴结肿瘤转移情况。评价药物副作用：比较各组治疗前一天、第三次给药后第十天裸鼠白细胞计数变化；比较各组裸鼠皮肤破溃出血、体重增减情况。结果1.各组药物对裸鼠荷瘤模型移植瘤生长的影响绘制的荷瘤鼠移植瘤生长曲线图表明,各实验组瘤内注药侧移植瘤生长速度由快到慢依次为：对照组、Bev组、5-FU组、5-FU+Bev联合组,且5mm组及10mm组中相应各组瘤内注药侧移植瘤生长趋势相同。各组非注药侧侧移植瘤生长趋势无明显差异(数据未列出)。2.各组药物对肿瘤生长的抑制作用计算给药后第18天各组肿瘤生长抑制值(T/C值)。肿瘤生长抑制值(T/C值)=实验组平均瘤重/对照组平均瘤重×100%[39,40]。T/C值≤42%为药物有抗肿瘤效应的最低标准；T/C值<10%为药物有高度抗肿瘤活性的标准[39,401。5mm组中,各实验组T/C值分别为：5-氟尿嘧啶组42%,贝伐单抗组85%,5-FU+Bev联合组20%；10mm组中,各实验组T/C值分别为：5-氟尿嘧啶组66%,贝伐单抗组98%,5-FU+Bev联合组32%。3.各组药物延缓肿瘤生长的作用以瘤内注药侧移植瘤直径达15mm为标准,T-C值为实验组与对照组瘤内注药侧移植瘤直径达15mm天数之差[39,401。5mm组中,5-氟尿嘧啶组、贝伐单抗组、5-FU+Bev联合组T-C值分别为5.5,-2.5,14.5；10mm组中,5-氟尿嘧啶组、贝伐单抗组、5-FU+Bev联合组T-C值分别为10.5,2,20.5。肿瘤体积倍增时间(Tumor-doubling Time,Td),为实验组达标天数与对照组达标天数之比；LCK=T-C值/(Td×3.32)LCK>1,表示药物有抗肿瘤效果,LCK<1,表示药物无抗肿瘤效果,即肿瘤模型对药物抵抗[39,40]。5mm组中,5-氟尿嘧啶组、贝伐单抗组、5-FU+Bev联合组LCK值分别为1.24,-0.89,2.32；10mm组中,5-氟尿嘧啶组、贝伐单抗组、5-FU+Bev联合组LCK值分别为1.09,0.44,1.31。4.各组药物使肿瘤体积缩小的作用本实验中观察到5-FU+Bev联合组瘤内注药侧移植瘤缩小,分别为：5mm组第6-14天,移植瘤体积由213.191mm3缩小至170.483mm3,肿瘤体积缩小20.03%；10mm组第4-6天,第12-14天两度出现移植瘤体积缩小,分别由389.512mm3缩小至373.114mm3,肿瘤体积缩小4.21%,422.830mm3缩小至349.573mm3,肿瘤体积缩小17.33%。5.各组药物对远处肿瘤生长的影响以单因素方差分析比较各组给药后第18天双侧移植瘤体积,发现与对照组相比,各实验组瘤内注药侧移植瘤体积均显著缩小(P<0.05),而各组非注药侧移植瘤体积无统计学差异(P>0.05)。以瘤内注药侧移植瘤直径达15mmm为观察终点,断颈法处死裸鼠,剥离瘤体,测定湿重及瘤体积。各实验组瘤内注药侧移植瘤直径生长至15mm的天数分别为,5mm组：对照组24天,5-FU组32天,Bev组20天,5-FU+Bev联合组40天；10mmm组：对照组18天,5-FU组24天,Bev组20天,5-FU+Bev联合组36天。剥离的各组非注药侧移植瘤湿重(g)分别为：5mmm组：对照组0.85,5-FU组1.52,Bev组1.04,5-FU+Bev联合组2.26；10mm组：刘照组0.84,5-FU组1.10,Bev组0.97,5-FU+Bev联合组2.12；各组非注药侧瘤体积(mm3)分别为：5mm组：对照组880.52,5-FU组1525.88,Bev组1007.06,5-FU+Bev联合组2283.10；l0mm组：对照组868.14,5-FU组1099.13,Bev组971.35,5-FU+Bev联合组2105.39。以配对t检验比较各实验组双侧移植瘤体积及湿重,除对照组外,5-氟尿嘧啶组、贝伐单抗组、5-FU+Bev联合组瘤内注药侧移植瘤湿重较非注药侧明显减轻(P<0.05),瘤内注药侧移植瘤体积较非注药侧明显缩小(P<0.05)。6.各组药物对裸鼠肝脏、脾脏、肺脏、淋巴结肿瘤转移的影响经解剖检查,各实验组裸鼠肝脏、脾脏、肺脏均未见肿瘤转移,各组淋巴结转移数目分别为：对照组4.75,5-氟尿嘧啶组4.75,贝伐单抗组5.00,5-FU+Bev联合组5.25；经单因素方差分析,各组淋巴结转移数目无统计学差异(P>0.05)7.药物副作用评价与对照组相比,各治疗组裸鼠均有皮肤破溃出血发生,经安尔碘消毒处理后,溃疡均能1天内结痂,创面无渗血、感染等。5-FU+Bev联合组裸鼠体重减轻量较对照组、5-氟尿嘧啶组、贝伐单抗组低(P<0.05),而5-氟尿嘧啶组、贝伐单抗组与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。与各组相比,5-氟尿嘧啶组裸鼠白细胞计数明显降低(P<0.05)；贝伐单抗组、5-FU+Bev联合组裸鼠白细胞计数与对照组相比无统计学差异(P>0.05)。结论1.5-氟尿嘧啶瘤内注射可抑制结肠癌的生长,且抑瘤作用强于贝伐单抗；两者联合瘤内注射有协同抑制裸鼠结肠癌移植瘤体积增长的作用。2.5-氟尿嘧啶、贝伐单抗单用及两者联合瘤内注射给药,对远处(即非注药侧)移植瘤生长无明显抑制作用。3.5-氟尿嘧啶、贝伐单抗联合用药能减轻5-氟尿嘧啶或贝伐单抗单用对荷瘤鼠的体重减轻、白细胞计数减少等副作用。